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目的:观察硝菔通结方对模型大鼠结肠动力的影响,从肠神经系统角度探讨硝菔通结方治疗慢传输型便秘(slow transit constipation,STC)的作用机制,为临床治疗便秘提供新的研究思路。
方法:1.随机将SD大鼠60只分为空白组10只,造模组50只。运用大黄粉混悬液递增剂量三轮循环法对造模组大鼠进行慢传输型便秘模型复制,造模结束后根据大鼠首粒黑便排出时间,判断造模是否成功。
2.造模成功后将剩余大鼠分为空白组(NC组)、模型组(MC组)、莫沙必利组(MOS组)、张锡纯原方组(YF组)、硝菔通结方(XF组),予以相应药物灌胃4周。观察各组大鼠体质量、首粒黑便排出时间、便量。取结肠组织HE染色观察病理学变化;ELISA法检测血清5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT);采用免疫荧光法检测结肠组织中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、酪氨酸激酶受体B(tropomyosin receptor kinase B,TrkB)、5-HT、5-羟色胺4受体(5-hydroxytryptamine receptor 4,5-HT4R)的表达;RT-PCR检测结肠组织中BDNF、TrkBmRNA表达水平;Western-Blot检测结肠组织BDNF、TrkB、5-HT4受体的表达水平。
结果:1.硝菔通结方对STC模型大鼠体重、首粒黑便排出时间、24h便量的影响
(1)对体质量的影响:与NC组比较,MC组体重增长缓慢(P<0.01);与MC组比较,各用药组大鼠体重增长加快(P<0.01);与MOS组与YF组比较,XF组大鼠体重增长较快(P<0.05)
(2)对首粒黑便及便量的影响:与MC组比较,各组大鼠首粒黑便排出时间缩短,便量增多(P<0.01);与YF组比较,XF组大鼠便量增加(P<0.05)
2.硝菔通结方对STC模型大鼠结肠组织病理学变化的影响:
NC组肌层与黏膜层无明显病理改变;MC组出现肌层纤维坏死,肌间神经丛神经细胞出现空泡变性,肌细胞核固缩、深染,结缔组织疏松,有较多炎性细胞浸润,黏膜层内可见淋巴小结;与MC组比较,MOS组、YF组、XF组的炎症逐渐减轻,肌层纤维坏死与肌间神经丛神经变性减轻,结缔组织紧密,胞核饱满且无固缩。
3.硝菔通结方对STC模型大鼠结肠组织中BDNF、TrkB、5-HT4受体蛋白表达的影响
MC组大鼠BDNF、TrkB、5-HT、5-HT4受体的荧光表达低于NC组(P<0.05);与MC组相比,MOS组BDNF、TrkB、5-HT、5-HT4受体的荧光表达增多(P<0.05),YF组BDNF、5-HT的荧光表达增多(P<0.01/P<0.05),TrkB、5-HT4受体的表达有增多趋势(P>0.05),XF组BDNF、TrkB、5-HT、5-HT4受体的荧光表达均增多(P<0.01/P<0.05);MC组BDNF、TrkB、5-HT4受体的表达明显低于NC组(P<0.01),各给药组BDNF、TrkB、5-HT4受体的表达量比MC组增多(P<0.05/P<0.01),XF组BDNF、TrkB、5-HT4受体的表达比YF组显著增多(P<0.01)。
4.硝菔通结方对STC模型大鼠结肠组织中BDNF、TrkBmRNA含量的影响
与NC相比,MC组BDNF、TrkBmRNA的表达水平显著降低(P<0.01);与MC相比,MOS组、YF组、XF组BDNF、TrkBmRNA的表达水平升高(P<0.05/P<0.01);与YF组相比,XF组BDNFmRNA的表达增多(P<0.05),TrkBmRNA的表达有增多趋势(P>0.05)。
结论:1.硝菔通结方能够改善慢传输型便秘模型大鼠的便秘症状,缩短首粒黑便排出时间,增加粪便排出量。
2.硝菔通结方能通过调节肠神经系统增加血清5-HT,增多BDNF、TrkB、5-HT、5-HT4受体的表达,增强BDNF、TrkBmRNA的表达。
3.硝菔通结方可能通过调节肠神经系统内神经递质的传输,从而改善慢传输型便秘大鼠结肠动力障碍症状,起到治疗慢传输型便秘的作用。
方法:1.随机将SD大鼠60只分为空白组10只,造模组50只。运用大黄粉混悬液递增剂量三轮循环法对造模组大鼠进行慢传输型便秘模型复制,造模结束后根据大鼠首粒黑便排出时间,判断造模是否成功。
2.造模成功后将剩余大鼠分为空白组(NC组)、模型组(MC组)、莫沙必利组(MOS组)、张锡纯原方组(YF组)、硝菔通结方(XF组),予以相应药物灌胃4周。观察各组大鼠体质量、首粒黑便排出时间、便量。取结肠组织HE染色观察病理学变化;ELISA法检测血清5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT);采用免疫荧光法检测结肠组织中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、酪氨酸激酶受体B(tropomyosin receptor kinase B,TrkB)、5-HT、5-羟色胺4受体(5-hydroxytryptamine receptor 4,5-HT4R)的表达;RT-PCR检测结肠组织中BDNF、TrkBmRNA表达水平;Western-Blot检测结肠组织BDNF、TrkB、5-HT4受体的表达水平。
结果:1.硝菔通结方对STC模型大鼠体重、首粒黑便排出时间、24h便量的影响
(1)对体质量的影响:与NC组比较,MC组体重增长缓慢(P<0.01);与MC组比较,各用药组大鼠体重增长加快(P<0.01);与MOS组与YF组比较,XF组大鼠体重增长较快(P<0.05)
(2)对首粒黑便及便量的影响:与MC组比较,各组大鼠首粒黑便排出时间缩短,便量增多(P<0.01);与YF组比较,XF组大鼠便量增加(P<0.05)
2.硝菔通结方对STC模型大鼠结肠组织病理学变化的影响:
NC组肌层与黏膜层无明显病理改变;MC组出现肌层纤维坏死,肌间神经丛神经细胞出现空泡变性,肌细胞核固缩、深染,结缔组织疏松,有较多炎性细胞浸润,黏膜层内可见淋巴小结;与MC组比较,MOS组、YF组、XF组的炎症逐渐减轻,肌层纤维坏死与肌间神经丛神经变性减轻,结缔组织紧密,胞核饱满且无固缩。
3.硝菔通结方对STC模型大鼠结肠组织中BDNF、TrkB、5-HT4受体蛋白表达的影响
MC组大鼠BDNF、TrkB、5-HT、5-HT4受体的荧光表达低于NC组(P<0.05);与MC组相比,MOS组BDNF、TrkB、5-HT、5-HT4受体的荧光表达增多(P<0.05),YF组BDNF、5-HT的荧光表达增多(P<0.01/P<0.05),TrkB、5-HT4受体的表达有增多趋势(P>0.05),XF组BDNF、TrkB、5-HT、5-HT4受体的荧光表达均增多(P<0.01/P<0.05);MC组BDNF、TrkB、5-HT4受体的表达明显低于NC组(P<0.01),各给药组BDNF、TrkB、5-HT4受体的表达量比MC组增多(P<0.05/P<0.01),XF组BDNF、TrkB、5-HT4受体的表达比YF组显著增多(P<0.01)。
4.硝菔通结方对STC模型大鼠结肠组织中BDNF、TrkBmRNA含量的影响
与NC相比,MC组BDNF、TrkBmRNA的表达水平显著降低(P<0.01);与MC相比,MOS组、YF组、XF组BDNF、TrkBmRNA的表达水平升高(P<0.05/P<0.01);与YF组相比,XF组BDNFmRNA的表达增多(P<0.05),TrkBmRNA的表达有增多趋势(P>0.05)。
结论:1.硝菔通结方能够改善慢传输型便秘模型大鼠的便秘症状,缩短首粒黑便排出时间,增加粪便排出量。
2.硝菔通结方能通过调节肠神经系统增加血清5-HT,增多BDNF、TrkB、5-HT、5-HT4受体的表达,增强BDNF、TrkBmRNA的表达。
3.硝菔通结方可能通过调节肠神经系统内神经递质的传输,从而改善慢传输型便秘大鼠结肠动力障碍症状,起到治疗慢传输型便秘的作用。