黄秋葵毛状根培养体系的建立及次生代谢产物的研究

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黄秋葵(Abelmoschus esculentus L.Moench)系锦葵科秋葵属一年生草本植物,原产非洲热带地区。黄秋葵的花、种子、根均可入药,对恶疮及痈疖有良好疗效。此外,黄秋葵富含丰富的多种维生素和微量元素硒、蛋白质、脂肪、可溶性纤维、多糖类化合物、黄酮以及生物碱等多种活性成分。经常食用能帮助消化、降低血脂,增强人的体力和耐力。有保护肠胃、肝脏、皮肤和粘膜,增强皮肤弹性的作用;并对胃炎、胃溃疡、肝脏等疾病均有疗效。还有增强身体耐力和强肾补虚的作用,被誉为“植物伟哥”。本文筛选出发根农杆菌R1601侵染黄秋葵诱导出毛状根。其中,黄秋葵叶片在正面放置在培养基上,侵染时间为8mmin,预培养时间为2d-3d时,毛装根的诱导率最高。诱导出的毛状根经PCR检测后,在500-750bp间出现预期条带,表明发根农杆菌的特异基因rolC成功转入黄秋葵毛状根中。证明农杆菌R1601质粒的T-DNA已经整合进黄秋葵毛状根的基因组中。经过转化的毛状根在无添加任何激素的培养基上生长迅速并显现出典型的毛状根特征:根毛密、分枝多且失去向地性。在增值过程中研究了不同液体培养基、不同蔗糖浓度和不同外源激素对黄秋葵毛状根的影响。结果表明:MS液体培养基对毛状根的增值效果最好,25d后增值倍数将近26倍,低盐培养基White最差,增值倍数仅为3;蔗糖浓度为3%时增值倍数最高,符合文献报道;外源激素0.5mg/L IAA的增值倍数最高,高达48.55,为不添加外源激素培养基中毛状根生长量的1.87倍。分别提取黄秋葵毛状根中总黄酮和多糖这两种次生代谢产物,通过使用硝酸铝显色法和苯酚-硫酸比色法对黄秋葵毛状根中的总黄酮和多糖进行含量测定。试验结果显示,在黄秋葵毛状根中总黄酮的含量达到16.4%,高于黄秋葵嫩果中2.796%的含量5.9倍。在对黄秋葵毛状根多糖的提取中发现其多糖含量同样高于原植物,与原植物平均多糖含量1.642%相比,在试验中获得的16.6%的含量高于原植物10.11倍。黄酮类化合物是一种很强的抗氧化剂,可有效清除体内的氧自由基,并有除菌作用,试验中对黄秋葵毛状根提取物进行抑菌研究,研究结果表明黄秋葵毛状根中含有的总黄酮对大肠杆菌ATCC8099有明显的抑菌作用,50mg/ml的样品溶液对大肠杆菌的抑菌效果最佳,抑菌率为86.67%,浓度为25mg/ml的样品溶液次之,但也可达到66.67%,可是12.5mg/ml的样品溶液对大肠杆菌的抑菌率却为0。样品溶液对金黄色葡萄菌ATCC6538的抑菌率为0。
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