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目的：喹乙醇是一种人工合成的抗菌促生长剂，因其具有效率高、毒性低、残留少等特点，在中国作为饲料添加剂广泛使用。喹乙醇药物毒性作用原理和相关机制尚不明确，对药物使用剂量范围没有明确规定。由于喹乙醇药物使用不当，大量动物中毒死亡事件时有发生，直接或间接危及人类健康。本试验对喹乙醇诱导人胚肾HEK-293细胞毒性相关指标进行检测，通过观察细胞氧化应激的产生和溶酶体、线粒体膜稳定性的改变，从而探讨喹乙醇对DNA链断裂损伤可能遗传毒性机制，为进一步评估喹乙醇对人类健康的影响提供试验依据。方法：在本次试验中，选择人胚肾HEK-293细胞为研究对象，通过单细胞凝胶电泳(SCGE)试验技术检测并观察喹乙醇对细胞DNA的损伤情况；WesternBlotting免疫印记技术用于检测DNA损伤相关蛋白p53的表达水平；Real-timePT-PCR技术用于检测DNA损伤相关基因ATM和p53的表达水平。为探讨其可能的遗传毒性机制，荧光分光光度计对以下指标进行检测：吖啶橙（AO）染色法用于检测细胞内溶酶体膜稳定性；2’，7’—二氢二氯荧光素（DCFH-DA）染色法用于检测细胞内ROS水平；苯二醛(OPT)染色法用于检测细胞内GSH水平；罗丹明123(Rhodamine123)染色法用于检测细胞内线粒体膜电位。地昔帕明（50μM）和N-乙酰半胱氨酸（N-Acetylcysteine,NAC）（10mM）分别作为溶酶体膜稳定性和氧化损伤的保护剂，对HEK-293细胞进行预处理，为探讨喹乙醇诱导HEK-293细胞DNA链断裂损伤相关途径机制提供依据。试验结果用SPSS13.0进行统计分析。结果：HEK-293细胞经不同浓度喹乙醇（200、400、800μg/ml）药物处理2h，试验结果分析得出：尾长（Tail Length）分别为42.88μm，74.10μm，84.16μm；尾DNA百分含量（Tail DNA％）分别为34.06%，36.30%，50.83%；尾矩（Tailmoment）分别为15.69μm%，28.72μm%，43.95μm%，与空白对照组比较，200-800μg/ml药物处理组均有统计学差异（P＜0.01）且呈剂量依赖关系。喹乙醇（200，400，800μg/ml）作用细胞2h，与空白对照组比较，细胞内AO的荧光强度分别增加了24.66%，34.93%，48.07%（P＜0.05，P＜0.01）；浓度为800μg/ml药物处理组ROS水平升高了67.89%（P＜0.01）；浓度为400μg/ml和800μg/ml药物处理组GSH水平分别下降了26.92%和41.58%（P＜0.01）。喹乙醇（200，400，800μg/ml）作用细胞12h，与空白对照组比较，浓度为400μg/ml和800μg/ml药物处理组细胞内线粒体膜电位分别下降了30.08%和44.95%（P＜0.01）；浓度为400μg/ml和800μg/ml药物处理组p53蛋白表达量显著增加（P＜0.01），p53和ATM基因的表达水平显著升高（P＜0.01），呈剂量依赖关系。地昔帕明（50μM）预处理HEK-293细胞1h，与喹乙醇（800μg/ml）单独染毒剂量组相比，细胞内AO荧光强度下降了42.21%（P＜0.01）；NAC（10mM）预处理HEK-293细胞1h，与喹乙醇（800μg/ml）单独染毒剂量组相比，ROS水平下降了36.74%（P＜0.01），而GSH水平相对升高了70.65%（P＜0.01）；两种保护剂的干预都可以有效减轻喹乙醇引起的DNA链断裂损伤，使彗星拖尾明显减小。结论：喹乙醇可以诱导人胚肾HEK-293细胞DNA损伤，使DNA损伤相关蛋白p53和损伤基因ATM、p53表达上调。喹乙醇诱导细胞DNA损伤的作用机制与溶酶体途径有关：喹乙醇通过改变溶酶体膜通透性，释放一些酸性水解酶，从而导致DNA损伤。地昔帕明作为酸性鞘磷脂酶的抑制剂，通过抑制溶酶体的水解酶类，从而保护溶酶体膜稳定性，抑制p53蛋白的表达，减轻喹乙醇诱发的DNA链断裂损伤；喹乙醇诱导细胞DNA损伤与细胞内氧化损伤有关：NAC作为一种有效的抗氧化剂，可以降低细胞内氧化应激水平，升高GSH水平，使p53蛋白表达量减少，从而抑制喹乙醇对HEK-293细胞DNA损伤；喹乙醇诱导细胞DNA损伤与线粒体途径有关：喹乙醇可以通过降低线粒体膜稳定性，从而导致DNA链断裂损伤。通过时间点试验验证，喹乙醇作用HEK-293细胞2h可以引起溶酶体膜稳定性的改变并使细胞处于氧化应激状态，而线粒体膜稳定性未发生明显变化；药物作用时间延长至12h,细胞线粒体膜稳定性显著下降。由此推出：喹乙醇诱导HEK-293细胞DNA链断裂损伤，首先使溶酶体膜遭到破环，产生ROS，漏出的酸性水解酶和氧化自由基共同作用线粒体，使线粒体膜稳定性下降。