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目的:肺癌成为我国首位恶性肿瘤死亡原因,占全部恶性肿瘤死亡的五分之一,且发病率和死亡率仍在继续迅速上升。根据卫生部全国肿瘤防治办公室提供的资料显示:目前我国肺癌发病率每年增长26.9%,如不及时采取有效控制措施,预计到2025年,我国肺癌病人将达到100万,成为世界第一肺癌大国。研究调查显示:吸烟,环境污染化,职业暴露,生活方式不良化等多种因素都会影响肺癌的发生,流行病学研究已证明吸烟与肺癌发生之间存在密切关系,吸烟导致肺癌的发病率和死亡率持续上升。研究结果显示:在因肺癌死亡的病例中,80%男性、75%女性跟吸烟有关。随着肺癌分子流行病学,肺癌细胞分子生物学研究水平的不断进步,关于肺癌遗传易感性方向的研究逐步受到重视。恶性肿瘤的生长和转移要靠丰富的营养供给,组织中的营养物质和氧气通过血管进入肿瘤细胞,同时代谢产物排到细胞外,这就为肿瘤细胞生长和迁移奠定了重要的基础条件。研究肿瘤血管生成对了解恶性肿瘤的发生、发展、侵袭和转移的生物学特性和机理有重要的理论意义和临床应用价值。血管内皮生长因子(VEGF)是众多促进血管生成的因子之一,是生理性病理性血管生成调节物,可直接作用于血管内皮细胞,促进人类血管的生长,在肿瘤的形成,生长,侵袭及转移过程中扮演重要角色。近些年研究显示:肺癌、食管癌、前列腺癌,卵巢癌等肿瘤疾病患者的肿瘤组织、血、尿都可以检测到VEGF表达量相应增加。人类的VEGF基因具有一些高度多态性位点,这些多态性位点可能通过基因序列的改变,从而改变基因的转录活性进而影响相应蛋白的表达,导致了人类对疾病易感性的个体差异。研究表明VEGF基因启动子区-460T/C、-2578C/A单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与多种疾病的发病风险相关。本研究旨在探讨VEGF基因启动子区-460T/C、-2578C/A单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与中国北方汉族人群肺癌发病风险的关系,进一步阐明肺癌的分子生物学机制。方法:采用基于医院的病例-对照研究方法,采集251例肺癌患者(其中鳞状细胞癌95例、腺癌68例、小细胞肺癌41例、腺棘细胞癌26例、其他病理类型(包括粘液表皮样癌、大细胞未分化癌、透明细胞癌、肉瘤样癌、细支气管肺泡癌等)21例和255例健康对照个体的静脉抗凝血5ml,同时记录其病史和个人相关资料。采用蛋白酶K消化-饱和氯化钠盐析法于外周血采集一周内提取其白细胞DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP )分析方法和引物介导的限制性聚合酶链反应(primer-introduced restriction analysis PCR,PIRA-PCR)方法检测-460C/T和VEGF-2578C/ASNPs的基因型频率分布。数据统计分析采用SPSS13.0版软件包(SPSS Company,Chicago,Illinois,USA)进行分析,P<0.05认为有统计学意义。比较各位点基因型频率的观察值与预期值进行χ~2检验,并行Hardy-Weinberg平衡分析。病例组与对照组的年龄差异行t检验。病例组与对照组的基因型、等位基因型分布比较采用行×列表χ~2检验。采用EH软件分析VEGF-460C/T和-2578C/A基因单体型频率,2LD软件(1.2 version,Rockefeller University,New York)分析连锁不平衡状态。以非条件Logistic回归法计算经性别、年龄和吸烟状况校正的相对风险度的比值比(odds ratio, OR)及其95%可信区间(confidence interval, CI)。结果:1健康对照组中VEGF基因启动子区VEGF -460T/C和VEGF -2578C/A两个单核苷酸多态性位点的基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡分析(P>0.05)。2在肺癌患者组和健康对照组中,吸烟个体比例分别为为59.8%、41.6%,两组间存在显著性差异(χ~2=16.748,P<0.01)。吸烟可能显著增加肺癌发病风险(OR =3.103,95% CI =1.978-4.867)。3在肺癌患者组和健康对照组中,VEGF基因启动子区-460T/C单核苷酸多态的三种基因型频率(T/T、C/T、C/C)分别是52.2%、40.2%、7.6%和61.2%、35.3%、3.5 %。比较两组间基因型分布,存在显著性差异(P=0.042);等位基因频率分布(T、C)分别是72.3%、27.7%和78.8%、21.2%,两组间比较具有显著性差异(P=0.016)。与T/T、C/T基因型相比,携带C/C基因型可能明显增加肺癌的发病风险(OR=1.979, 95%CI =1.339-2.925)。4在肺癌患者组和健康对照组中,VEGF基因启动子区-2578C/A单核苷酸多态的三种基因型频率(C/C、C/A、A/A)分别是49.8%、43.0%、7.2%和60.4% 36.5% 3.1%。比较两组间基因型分布,具有显著性差异(P=0.019);等位基因频率分布(C、A)分别是71.3% 28.7%和78.6% 21.4%,两组间比较具有显著性差异(P=0.007)。与C/C、C/A基因型相比,携带A/A基因型可能明显增加肺癌的发病风险(OR=2.044, 95%CI =1.394-2.994)。5应用2LD软件对VEGF-460T/C与-2578 C/A多态性位点进行联合分析显示,两多态性位点间不存在连锁不平衡(D’=0.303717)。结论:1吸烟可以明显增加肺癌的发病风险。2 VEGF-460T/C单核苷酸多态性与肺癌发病风险相关,即携带C等位基因的基因型(C/T+C/C),可能显著增加肺癌的发病风险。3 VEGF -2578C/A单核苷酸多态性可能显著增加肺癌的发病风险。4 VEGF基因启动子区-VEGF460T/C与-2578 C/A单核苷酸多态位点间不存在连锁不平衡。