β arestins转基因小鼠制备、建系及功能研究初探

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在G蛋白偶联受体(GPCRs,7TMRs)信号转导中,经典的理论认为β—arrestins使激活的受体与G蛋白解偶联(脱敏),阻断了受体信号转导,进而导致受体内吞。近来的研究发现β—arrestins不仅终止GPCRs的信号,还可以介导GPCRs的内吞和运输,引发GPCRs的新信号,以及介导GPCRs和其它信号通路间的交流。为了更进一步研究β-arrestins在活体水平上的功能定位,我们运用转基因技术,通过体外构建目的基因载体,原核期胚胎的显微注射,再进行PCR和SouthernBlot鉴定,最终制备了humanβarrestinⅠoverexpressionmice,humanβarrestinⅡoverexpressionmice,mouseβarrestinⅠRNAimice和mouseβarrestinⅡRNAimice四种转基因鼠。经过实时荧光定量PCR鉴定纯合小鼠。自此,系统便初步建立起来。然后,我们进行RT-PCR和免疫组化试验,进行蛋白表达鉴定。阿片受体属于GPCRs超家族。因此体内过量表达β—arrestins有可能引起阿片成瘾的变化。
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