真菌的次级代谢产物是新药和先导化合物的重要来源,然而随着越来越多的化合物被重复发现,真菌来源的天然产物发掘逐渐到了瓶颈期。与分散在整个真菌基因组中的初级代谢物合成所需的基因相反,编码活性酶以产生次级代谢物的基因常以连续的方式排列为生物合成基因簇(biosynthetic gene clusters,BGCs)。随着基因组测序技术的成熟和生物信息学分析方法的完善,研究人员发现真菌的BGCs十分丰富,然而由于实验室培养条件的限制,超过70%的生物合成基因簇处于沉默或未开发状态,表明真菌天然产物的发掘还有很大的空间。因此,如何激活这些沉默基因簇成为真菌天然产物研究的关键。本文选择丝状真菌海生哈茨木霉Trichoderma harzianum LZDX-32-08 为研究对象,利用构巢曲霉Aspergillus nzdulans A1145 及 LO8030 作为异源表达宿主,对 T.harzianum LZDX-32-08中沉默或低表达的生物合成基因簇进行探究。本文通过在A.nidulans A1145及LO8030中构建异源表达系统,发现空质粒pQFl(含AMA1序列)的引入使得构巢曲霉的虫草素(cordycepin,COR)平均产量较初始菌株分别提高了 1.72和1.84倍,其中A1145AMA1 T1在CD-ST培养基中的发酵产量最高达到277 mg/L。基于生物信息学分析和前期RT-PCR结果,本文选取海生T.harzianum LZDX-32-08基因组中沉默和低表达的两个生物合成基因簇:萜类(terpene)terpene C26 和聚酮类(polyketide synthase)PKS C8 进行研究。针对目标生物合成基因簇,利用酵母组装技术构建了包含两个生物合成基因簇 PKS C8 和 terpene C26 的重组质粒 pQF4(55 kb),pQF3(26 kb)。同时,为了验证C8基因簇中两个PKS基因的功能及PKS产物的母核结构,构建了只包含两个PKS核心基因的重组质粒pQF2(42 kb)。实验成功将海生T.harzianum LZDX-32-08菌株的两个基因簇相关基因转化到宿主A.nidulans A1145及LO8030中,且RT-PCR结果证实了两个基因簇中关键基因的表达。PKS C8基因簇与tln基因簇高度同源,分析转化子LC-MS结果得到分子量为220的化合物,推测为tricholignan A。另外,发现在CD-ST培养基上,UPLC结果显示terpene转化子有新的产物峰出现。然而由于液相显示响应信号值较低,分离困难,同时由于疫情影响,目前尚未分离出目标化合物,后期可以利用转化子LO8030 C26 T7或T12进行产物分离和结构鉴定的研究。