沙咪珠利（Ethanamizuril,AC₄）是中国农业科学院上海兽医研究所自主研发的新型三嗪类抗球虫候选药物。已有的研究结果显示,该药抗球虫效果好,毒副作用低,并且与地克珠利等其他三嗪类药物无交叉耐药性,具有很好的应用前景。在沙咪珠利的开发研究工作中,对其进行代谢研究是必不可少的过程。为此,本实验围绕沙咪珠利在鸡体内的代谢组学和体外的代谢研究而展开,一方面研究沙咪珠利给药前后引起鸡内源性代谢物的变化,找出主要生物标志物,揭示沙咪珠利在鸡体内的作用机理。另一方面建立鸡肝肾微粒体和肝肾细胞的体外代谢平台,鉴定沙咪珠利在鸡体外的代谢产物,探究沙咪珠利在鸡体外的代谢机制。这对沙咪珠利的进一步研究,如沙咪珠利抗球虫作用的机理、药效学和毒理学提供了重要的数据线索,为沙咪珠利在鸡体外的进一步代谢（如参与的代谢酶、对酶的抑制诱导作用等）研究奠定了基础,并对其兽药残留研究提供重要的指导作用。主要内容有:1.建立了沙咪珠利在鸡体内的代谢组学平台,利用GC-Q-TOF-MS技术分析了沙咪珠利给药后实验组和正常对照组鸡的血浆中代谢谱的差异。利用非监督PCA的方法,得到给药实验组与正常对照组鸡代谢谱分离的趋势,进一步利用有监督的正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）的方法,清晰地观察到沙咪珠利给药组与正常对照组之间的代谢轮廓的差异。鉴定了279个代谢物,数据分析后得到28个差异代谢物。通过对其代谢通路的分析,确认主要包括氨酰-tRNA合成代谢,甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸代谢,半胱氨酸、蛋氨酸代谢,维生素代谢,氰基氨基酸代谢的通路发生了明显的变化。并从中进一步筛选出了具有标志代谢物组作用的7个关键代谢物:L-赖氨酸、L-丝氨酸、L-蛋氨酸、D-甘露糖、硬脂酸、木糖、十六酸甘油一脂。通过分析沙咪珠利给药前后鸡体内源性代谢产物的变化,得出其可能的抗球虫作用机理。2.建立了鸡肝肾微粒体制备以及活性检测方法,优化了沙咪珠利在鸡肝肾微粒体中代谢的孵育条件,并通过该模型利用UPLC初步确定了沙咪珠利在鸡肝肾微粒体中的代谢产物,并利用UPLC-Q-TOF-MS技术对代谢产物进行初步的定性分析。本实验采用差速离心法成功制备出鸡肝肾微粒体,并通过Lowrry法测定微粒体中蛋白的含量,结果表明鸡肝、肾微粒体的蛋白含量分别为17.37±0.55 mg/mL、5.37±0.24 mg/mL,利用一氧化碳还原差示光谱法测定微粒体的活性,结果表明其在450 nm处有最大吸收峰,均具有很好的活性。最终确定沙咪珠利在鸡肝肾微粒体和肝肾细胞中的代谢产物都为M,相对分子质量为311.1,与AC₄相差42,M1以[M+H]⁺存在,为AC₄的去乙酰基水解产物,代谢不依赖辅酶NADPH,且同等蛋白浓度的鸡肾微粒体代谢能力明显强于肝微粒体。3.分别采用原位二步灌流法和胰蛋白酶连续消化法制备鸡原代肝、肾细胞,培养后进行沙咪珠利在鸡肝肾细胞的体外温孵实验,利用UPLC-Q-TOF-MS技术对代谢产物进行初步的定性分析。倒置相差显微镜显示培养的肝肾细胞活性好,通过该模型温孵,结果显示AC₄在鸡肝肾细胞的体外代谢与在肝肾细胞的代谢相同,均产生一个相同的代谢物M。