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目的:宫颈癌是常见妇科恶性肿瘤之一。传统手术及放化疗均在一定程度上引起机体的免疫功能低下,不利于疾病的进一步治疗。因此,宫颈癌的辅助免疫治疗逐渐引起人们的关注。肿瘤细胞可抑制免疫功能逃避免疫监视,是肿瘤发生发展的重要机制。研究能够逆转肿瘤免疫抑制的有效药物,是开发抗肿瘤药物的新思路。三氧化二砷（Arsenic trioxide, As2O3）是传统中药砒霜的有效成分,近年来它被证明是一种广谱抗癌药物,对治疗急性早幼粒白血病有显著疗效。有关As2O3抑制细胞生长增殖的基础研究报道很多;而对其影响肿瘤细胞免疫抑制功能,从免疫抑制角度揭示其抗肿瘤机理的系统研究,国内外尚少见报道。本课题旨在原有工作基础上,试验选用其培养上清确有免疫抑制作用的宫颈癌Hela细胞株,研究其经As2O3作用后再培养的上清对免疫功能的影响,从逆转肿瘤免疫抑制的角度揭示As2O3抗肿瘤免疫作用新机制,为进一步探索靶途径、靶位点,开发具有我国自己特色和自主知识产权的抗肿瘤中药疗剂,以及指导临床合理应用奠定实验基础和提供理论依据。方法:确定Hela细胞最佳接种浓度及培养时间后,MTT法筛选对Hela细胞无直接毒性的最高As2O3浓度。制备经As2O3作用48h后的培养上清,洗涤去除As2O3,收集连续两次以新鲜培液进行48h再培养的Hela细胞上清（分别称为As-S1、As-S2）,以不经As2O3作用的相应同步培养的Hela细胞培养上清作对照（分别称为Control-S1、Control-S2 ）。研究这些上清对人外周血淋巴细胞PHA诱导转化,CD3ε+、CD3ε+ζ+、CD4+、IL-2Rα+、CD4+CD25+、CD3ε-ζ+及CD16+表达等免疫功能指标的影响。结果:1.经MTT法确定实验用Hela细胞接种浓度为2×105/mL,培养时间为48h;经MTT法确定实验用对Hela细胞无直接毒性作用As2O3最高浓度为0.31mg/L。2.在以培液代替Hela细胞培养上清进行作用的正常对照组（Control）,PHA诱导转化A值、CD3ε+、CD3ε+ζ+、CD4+、IL-2Rα+、CD4+CD25+、CD3ε-ζ+及CD16+细胞的百分率分别为0.74±0.11、25.09%±5.84%、86.07%±16.05%、40.73%±12.67%、39.11%±12.83%、38.53%±16.36%、83.33%±16.46%、73.37%±12.75%。与之相比,48h培养的Hela单纯肿瘤细胞培养上清（Control-S1）可使所检测的这8项免疫功能指标明显受抑,分别为0.44±0.11 （P<0.001）、54.66%±6.21% （P<0.001）、0.96%±0.34% （P>0.001）、22.2%±4.23% （P<0.001）、20.92%±3.44% （P<0.001）、52.82%±7.28% （P<0.05）、0.74%±0.24%（ P<0.05）、2.15%±0.92% （P<0.001）,抑制率分别为40.7±11.77、25.09%±5.84%、86.07%±16.05%、40.73%±12.67%、39.11%±12.83%、38.53%±16.36%、83.33%±16.46%、73.37%±12.75%。4.经As2O3作用后的Hela肿瘤细胞:其第一次48h再培养上清（As-S1）与相应对照上清（Control-S1）相比,对PHA诱导转化,CD3ε+、CD3ε+ζ+、CD4+、IL-2Rα+、CD4+CD25+、CD3ε-ζ+及CD16+表达的抑制作用均明显降低（分别为P<0.001,P<0.001,P<0.001,P<0.05,P<0.05,P<0.05,P<0.001,P<0.05）。其第二次48h再培养上清（As-S2）与As-S1相比,对PHA诱导转化,CD3ε+、CD3ε+ζ+、CD4+、IL-2Rα+及CD3ε-ζ+表达的抑制作用明显回升（分别为P<0.05,P<0.05,P<0.001,P<0.05,P<0.05,P<0.001）,恢复至相应对照上清Control-S2水平（均P>0.05）;对CD4+CD25+和CD16+表达的抑制无显著变化（均P>0.05）。结论:1. Hela细胞培养上清对T细胞PHA诱导转化、CD3+、CD4+、IL-2Rα+和CD4+CD25+的表达抑制率约40%,对T细胞CD3ε+ζ+及NK细胞CD3ε-ζ+、CD16+表达的抑制率约70%。2. As2O3作用Hela细胞后,可使相应再培养上清对人外周血淋巴细胞相关免疫功能指标的抑制发生一定程度的下调。3. As2O3作用于Hela细胞后的再培养上清对PHA诱导转化、CD3ε+ζ+、CD3ε-ζ+、CD4+及IL-2Rα+表达抑制的下调可持续48h;对CD16+表达抑制的下调至少可持续96h,对CD4+CD25+表达促进的下调亦可持续96h。4.下调肿瘤免疫抑制可能是三氧化二砷的抗瘤作用机制之一。