大豆异黄酮提取纯化工艺及药理作用研究

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大豆异黄酮(soybean isoflavones)简称为ISO,为多酚类的混合物。在植物体内以12种形式存在,包括染料木素、大豆苷元和黄豆苷元以及它们的β-葡萄糖苷形式存在,其中糖苷形式占绝大多数。众多学者对其化学成分、药理作用、临床应用做了研究,但对其黄酮类化合物的研究尚浅。本文以豆粕为材料对大豆异黄酮进行了研究,建立了大豆总异黄酮(total soybean isoflavones T-ISO)含量测定方法,确立了T-ISO的提取、分离、纯化以及酸水解总黄酮苷的工艺路线;并对异黄酮苷元检测方法和T-ISO降血脂以及抗氧化进行了探讨和研究,研究结果如下:1.研究了紫外可见分光光度计对豆粕中大豆总异黄酮的检测法,大豆异黄酮特殊结构在紫外区有吸收峰可以检测提取总黄酮含量。2. T-ISO提取的工艺路线为:提取溶剂为60%乙醇,提取温度为80℃,液料比为20:1,提取时间为2h,提取1次。提取率为0.59%。本实验工艺路线与文献记载工艺路线相比较,具有生产能耗低,工作程序少等优点,更适合于工业生产。3.利用大孔树脂和有机溶剂萃取法对粗提物进行了纯化。以总异黄酮回收率为指标,优化了大豆总异黄酮的纯化工艺路线。纯化工艺为:选用D4006型大孔树脂,1BV(柱床体积)=40mL时,大豆总异黄酮上样液质量浓度为2mg/mL,速率为2mL/min,洗脱剂为80%乙醇,洗脱速率为2mL/min,洗脱剂用量为3BV,通过两次过柱大豆总异黄酮的回收率为56.22%,按此条件纯化后的大豆总异黄酮纯度达30.58%。4. T-ISO酸水解的工艺路线为:甲醇浓度70%、温度65℃、提取时间3h和盐酸浓度为3mol/L。在此条件下,总黄酮苷元的得率为7.42%。5. T-ISO有一定的降血脂的作用。各剂量组的小鼠血清中的TC、LDL-C、TG与模型组相比,都有一定程度的降低。6. T-ISO对羟自由基的清楚效果比较明显,与抗坏血酸对比,大豆异黄酮精提物和抗坏血酸清除-OH自由基的ECso分别为0.101mg/mL,0.132mg/mL。其清除OH自由的能力明显强于抗坏血酸。
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