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牛病毒性腹泻-黏膜病病毒（Bovine viral diarrhea-mucosal disease virus，BVDV）是黄病毒科瘟病毒属（Flaviridae pestivirus）的成员，主要引起牛病毒性腹泻-黏膜病（BVD-MD），症状为腹泻，急、慢性黏膜病，持续性感染与免疫耐受，免疫抑制；母畜流产、死胎和畸形态等症状。该病主要感染牛，犊牛更易感，也可以感染其他的动物。牛病毒性腹泻病是世界范围的传染性疾病，具有较高的感染率，该病在我国二十几个省份存在，且有扩大趋势。 Erns和E2基因位于BVDV基因组5’端的三分之一部分，分别编码具有抗原性的囊膜蛋白Erns和E2。两种蛋白诱导易感动物产生的中和抗体均能抵抗BVDV和CSFV感染。所以利用Erns、E2蛋白作为诊断试剂具有重要价值。 本实验将实验室已有的质粒pMD18-T-E2经BamH Ⅰ、HindⅢ双酶切后，连接至杆状病毒转移载体pBlueBacHis2A上，构建成重组质粒pBlueBacHis2A-E2。同样利用DNA重组技术将E2基因连接至毕赤酵母转移载体pPIC9K上，构建成重组质粒pPIC9K-E2。 同样方法对实验室已有的BVDV Erns的PCR产物克隆至pMD18-T载体上，对其鉴定后，将Erns基因连接至杆状病毒转移载体pBlueBacHis2A上，构建成重组表达载体pBlueBacHis2A-Erns。将其与线性化杆状病毒DNA Bac-N-Blue共同转染Sf9昆虫细胞中，经过三轮的噬斑筛选，获得重组杆状病毒。经SDS-PAGE和Western-blotting分析表达产物的结果表明：Erns基因在杆状病毒表达系统中获得表达，表达产物大小约为30kDa，且具有良好的抗原性。 将重组质粒pBlueBacHis2A-Erns经EcoR Ⅰ利Not Ⅰ双酶切后，Erns基因亚克隆至表达载体pPIC9K上，经酶切和PCR鉴定，命名为pPIC9K-Erns。重组表达载体pPIC9K-Erns经Sal Ⅰ线形化后，电转化整合到毕赤酵母GS115基因组上，阳性转化子命名为GS115-pPIC9K-Erns。将GS115-pPIC9K-Erns在30℃条件下震荡培养，以1％的甲醇诱导，BVDV Erns融合蛋白在毕赤酵母表达系统中获得表达。经SDS-PAGE分析，表达蛋白的分子量大小为37kDa左右。 本实验结果表明Erns基因在昆虫杆状病毒表达系统中充分表达，且具有良好的抗原性。这为进一步的诊断试剂盒的研制和亚单位疫苗的制备奠定了基础，同时也为研究Erns蛋白生物功能提供材料。