基于DNA末端保护和氧化石墨烯的生长素荧光生物传感器的研制

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生长素除了包括吲哚-3-乙酸(IAA)等植物内源激素,还包括2,4-D等人工合成生长素。其中IAA是植物自身合成的一种微量有机物质,调节植物的整个生长发育过程。2,4-D则是人工合成生长素类物质,多应用于农业作为除草剂使用。传统的生长素检测方法与技术均存在一定的不足,很难实现对其快速、精准的检测,近年来相继出现的生长素测定新方法大大的提高了生长素测定的精度,但还是不能够满足目前对其检测的需求。为了探索出更有效的生长素检测新方法,本文尝试了基于DNA末端保护的IAA荧光生物传感器和基于氧化石墨烯(GO)修饰的2,4-D免疫竞争荧光生物传感器的研制,获得结果如下:(1)构建了基于DNA末端保护的荧光生物传感器检测IAA的新方法。该方法应用了一条修饰了IAA的杂交链,当加入含有IAA的样品反应一段时间后,样品中的游离IAA可以跟反应液中的IAA抗体蛋白相结合,以阻碍后续反应中抗体和衍生的IAA的结合,继而限制性内切酶Fok I会产生剪切活性通过对荧光探针的反复剪切放大荧光信号响应,从而得到IAA浓度和荧光信号之间的关系。(2)探明了DNA末端保护的荧光生物传感器的检测IAA的多项重要条件。进行了IAA耦合DNA的试验操作,并利用透析和液相色谱对衍生的IAA进行了分析和纯化,优化了体系所需要的鼠抗IAA抗体浓度为50μtg/mL(3)利用DNA末端保护的荧光生物传感器对IAA进行了定量测量。试验对该荧光传感器在IAA浓度0.1ng/mL-20ng/mL的范围进行了检测。检测IAA的最低浓度为0.1ng/mL。比常用的酶联免疫法最低检测限低了2个数量级,特异性试验证明了该荧光生物传感器的专一性好。(4)创建了基于氧化石墨烯的荧光生物传感器检测2,4-D的新方法。该方法采用2,4-D对氧化石墨烯进行修饰,衍生的2,4-D耦合氧化石墨烯会由于荧光共振能量转移而猝灭标记在抗体上的荧光基团,当均相溶液中存在目标物2,4-D时,2,4-D会结合标记了荧光基团的抗体蛋白使荧光抗体蛋白远离氧化石墨烯表面,从而检测出荧光信号,建立2,4-D浓度和荧光信号之间的关系。(5)摸索了基于氧化石墨烯的荧光生物传感器检测2,4-D的基本条件。优化了荧光标记抗体的的最佳浓度为05μg/mL,衍生的氧化石墨烯的最佳浓度为0.6mg/mL。(6)利用基于氧化石墨烯的荧光生物传感器对2,4-D进行了测量。试验对2,4-D浓度1ng/mL-100ng/mL范围进行检测,获得了2,4-D浓度与荧光强度关系的标准曲线,本试验研制的荧光生物传感器检测的2,4-D最低浓度为1ng/mL,符合国家标准的检测限。
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