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在前期工作中，本研究室构建了在紫云英根瘤中增强表达的cDNA文库，从文库中筛选获得若干根瘤特异表达的紫云英基因。其中编码转脂质蛋白(LTP)的基因AsE246经进一步研究表明其作用与共生固氮密切相关。 利用酵母双杂交技术，我们筛选获得了与AsE246相互作用的候选靶蛋白基因AsDJL1的部分结构域。AsDJL1是DnaJ-like的同源基因，DnaJ蛋白是分子伴侣Hsp70蛋白的辅助蛋白，具有多种生物学功能，能够激活ATPase的活性，帮助蛋白折叠和进一步加工，增强生物抗性，使细胞膜免受重金属伤害等。 本课题对AsDJL1在与LTP基因AsE246的互作鉴定及其在紫云英共生固氮中的功能展开研究。首先利用cDNA末端快速扩增(RACE)方法获得AsDJL1基因盼全长，通过生物信息方法分析了该基因的功能结构域，通过构建系列截短突变体，在酵母双杂交体系中验证了两个目标蛋白的相互作用，确定了其互作的关键结构域。采用pull-down实验技术，证实了AsDJL1蛋白关键结构域在体外与AsE246蛋白的互作。进一步采用双分子荧光互补技术(BiFC)，检测了AsE246和AsDJL1在植物活细胞体内的蛋白相互作用及初步定位。 通过构建目标基因的超表达及沉默载体，检测了基因AsDJL1沉默和超表达后的共生固氮表型，为进一步研究AsDJL1蛋白在结瘤和固氮中的功能机制奠定良好工作基础。