目的:桑叶是我国传统中药材,在降血糖、降血脂等方面应用广泛,但在实际应用中存在品种混淆的问题,导致入药品种不明确。基于此,本研究对同属不同种桑叶进行了性状、理化鉴别和含量等方面的差异性实验,系统评价了同属不同种桑叶的药材质量,为鉴别不同种桑叶提供方法学基础,为确保临床精准用药提供实验依据。材料与方法:1材料:本课题实验所用13批桑叶,来源于国家种质镇江桑树圃、浙江农业科学院蚕桑研究所、新疆和田桑蚕科学研究所和中国食品药品检定研究院,经辽宁中医药大学康廷国教授鉴定为桑科桑属下不同种桑叶,入药部位为其干燥叶,凭证标本避光保存于辽宁中医药大学中医药创新工程技术中心304实验室。2方法:（1）本实验采用2020版《中国药典》第一部中的直接观察法、游标卡尺测量法对不同种的桑叶进行性状鉴别。采用水合氯醛透化法观察不同种桑叶的显微结构特征。采用药典中桑叶项下薄层鉴别方法,在紫外灯下对比不同种桑叶与标准桑叶药材的色谱图。采用《中国药典》（2020版）中通则下所规定的的标准方法对不同种桑叶药材中的一般物质及浸出物进行含量测定。（2）采用亚硝酸钠-硝酸铝法测定不同种桑叶中的总黄酮含量,并以总黄酮提取含量为评价指标,利用L9（3）4正交试验对桑叶中总黄酮的提取工艺进行优化。采用苯酚-硫酸法测定桑叶中总多糖含量。采用雷氏铵盐比色法测定桑叶中总生物碱含量。采用考马斯亮蓝法测定桑叶中总蛋白含量。（3）采用高效液相色谱法（HPLC）对不同种桑叶样品进行指纹图谱研究,使用2012版中药指纹图谱相似度评价软件进行相似度评价。使用SPSS26.0和SIMCA14.1软件进行聚类分析及主成分分析。结果:1.本草考证结果表明,古代有多种桑叶做药用,《本草纲目》中记载了白桑、子桑、山桑和鸡桑。《本草拾遗》中则认为鸡桑,最堪入用。2.桑叶性状鉴别的结果显示,不同种桑叶形状包括圆形、卵圆形、心脏型、广心型、斜卵形以及卵状椭圆形等;叶片大小多数在8-13 cm,鲁桑叶片较大约8-16 cm,白桑叶片较小约3-5 cm;桑叶边缘锯齿分为锐锯齿或钝锯齿,其中蒙桑叶缘齿尖具长刺芒。除新疆药桑和新疆白桑有浓烈气味外,其它桑叶无明显气味。3.显微鉴别结果显示,桑叶粉末黄绿色或黄棕色。具有钟乳体结构,直径在56-68μm。具气孔不定式,副卫细胞5-9个。非腺毛单细胞长48-220 pm,草酸钙簇晶直径4-12μm,具有螺纹导管、栅栏组织,偶见方晶。4.薄层鉴别结果显示,桑叶样品与桑叶标准药材对照,在相同的位置有蓝色和红色的荧光斑点,斑点位置大体相同,主要的差异表现在荧光斑点的强弱上。5.一般物质检查结果显示,不同种桑叶样品中水分含量范围为5.35-7.98%,平均含水量在6.30%。总灰分含量在2.12-3.99%,平均含量为3.09%。酸不溶性灰分为0.45-1.06%,平均含量为0.68%。醇溶性浸出物含量在9.97-14.72%,平均含量为11.79%。6.主要成分含量测定结果显示,不同种桑叶样品中,华桑中总黄酮成分含量最高（23.18mg/g）;瑞穗桑中总多糖含量最高（21.17 mg/g）;鸡桑中总生物碱成分含量最高（4.79mg/g）;蒙桑中总蛋白含量最高（87.8mg/g）。以总黄酮、总多糖和总生物碱为评价指标运用SPSS 26.0软件进行主成分分析,根据主成分得分系数,对主成分进行加权,计算出综合排名,前三名分别为鸡桑,华桑和蒙桑。7.指纹图谱结果显示,不同种桑叶样品的共有峰有15个,通过标准品指认出3、7、10号峰分别为绿原酸、异槲皮苷、紫云英苷。运用指纹图谱软件得出相似度在0.697-0.988。8.聚类分析结果显示,可将不同种桑叶药材分为两大类,广东桑、药桑、新疆白桑、白桑、垂枝桑为第一类,长果桑、鲁桑、蒙桑、瑞穗桑、鸡桑、山桑和华桑为第二类。主成分分析结果显示,绿原酸、异槲皮苷、紫云英苷和其他几种未知成分均作为主要信息参与了桑叶的质量表达。正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）结果表明,从HPLC指纹图谱的共有峰中筛选出引起桑叶药材种间差异的4个标志性成分,其中1个成分为紫云英苷。结论:1.建立了对同属不同种桑叶的性状、显微、薄层鉴别,一般物质检查及主要成分含量测定方法,制定出质量标准体系。2.得到同属不同种桑叶中总黄酮、总多糖、总生物碱和总蛋白的含量数据,为后期临床的更精准用药提供实验依据。3.对桑叶进行的性状、显微、薄层鉴别,一般物质检查、含量测定及指纹图谱研究,从不同方面反映不同种桑叶的差异性,为不同种桑叶的鉴别提供参考依据。4.通过多元统计分析,以总黄酮、总多糖和总生物碱为指标进行主成分分析,对不同种桑叶进行综合得分排名发现,鸡桑得分最高。以指纹图谱数据为基础进行多元统计学分析,找到造成种间差异的标志性物质,一种已知成分为紫云英苷。5.运用现代科学技术测出主要药效成分的含量,对其进行统计学分析。结果显示鸡桑综合得分第一,验证了古人根据实践应用所得出的“鸡桑,最堪入用”结论。为后续从药理上做进一步的验证奠定实验基础。