【摘 要】
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目的:探讨间充质干细胞标记的荧光磁性纳米粒子（FMNP-MSC）对肺癌A549在体内、外的影响;初步研究其作用机制;探讨磁流体热疗与MSC对肺癌协同抗肿瘤作用的可行性,将为肺癌治疗方法的探索提供一种新的思路。方法:体外合成荧光纳米磁性粒子（FMNP）;贴壁法分离、鉴定、诱导分化间充质干细胞（MSC）,进而进行MSC对FMNP的标记,制作间充质干细胞标记的荧光磁性纳米粒子（FMNP-MSC）;CK8
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目的:探讨间充质干细胞标记的荧光磁性纳米粒子（FMNP-MSC）对肺癌A549在体内、外的影响;初步研究其作用机制;探讨磁流体热疗与MSC对肺癌协同抗肿瘤作用的可行性,将为肺癌治疗方法的探索提供一种新的思路。方法:体外合成荧光纳米磁性粒子（FMNP）;贴壁法分离、鉴定、诱导分化间充质干细胞（MSC）,进而进行MSC对FMNP的标记,制作间充质干细胞标记的荧光磁性纳米粒子（FMNP-MSC）;CK8毒性实验检测FMNP对MSC的影响,普鲁士兰染色、激光共聚焦成像以及电镜观察标记情况。体外建立Transwell共培养系统,将FMNP-MSC与肺癌A549细胞共培养,倒置显微镜和透射电镜观察共培养后A549细胞的形态学变化;流式细胞术检测FMNP-MSC对A549细胞凋亡和细胞周期的变化;Transwell侵袭实验检测FMNP-MSC对A549细胞的侵袭抑制率;Western blot检测FMNP-MSC趋化因子受体（CXCR4、CCR7）的表达。体内建立肺癌A549裸鼠皮下移植瘤模型,等肿瘤直径长至约4mm时,将FMNP-MSC通过小鼠尾静脉注射到体内,荧光成像检测和磁共振成像检测FMNP-MSC对A549肺癌的趋向性。注射后一周,在交变磁场下热疗,每周在交变磁场下作用一次,连续4周,光纤测温检测肿瘤温度的变化,每周测量瘤体的长径和短径计算肿瘤体积变化,治疗4周后离断法处死小鼠,取出肿瘤组织,称取瘤重;光镜观察各组肿瘤组织病理学变化,Western-blot检测FMNP-MSC热疗后A549细胞凋亡蛋白（Bax、Caspase-3）、抗凋亡蛋白（Bcl-2）的变化。结果:FMNP的平均直径约为40-50nm,具有较强的顺磁性;成功分离、培养、鉴定出MSC;毒性实验证实一定浓度（<100ug/mL）FMNP对MSC的毒性低;FMNP对MSC具有较高的标记率;FMNP可以准确的进入到MSC细胞内部,而且对MSC的活性和形态无明显影响;FMNP-MSC在体外抑制人肺癌A549细胞的增值;诱导肺癌A549凋亡、阻滞细胞周期;明显降低肺癌A549细胞的侵袭率;可以明显降低肺癌A549细胞的侵袭率。体内实验证实,MSC可以将FMNP携带至肿瘤区域,在外加交变变磁场的作用下可以升温至53℃,FNMP-MSC热疗组小鼠肿瘤体积和重量增长受到明显抑制,FMNP-MSC组的小鼠肿瘤体积增长受到抑制,重量增长没有受到明显抑制。光镜观察提示实验组可见肿瘤细胞大片凋亡和坏死样改变,部分区域可见磁性粒子分布,FMNP-MSC治疗组可见大部分肿瘤细胞生长活跃,部分区域可见磁性粒子分布,部分区域肿瘤细胞出现细胞形态结构模糊,核固缩样表现。Western blot检测证实,Bax蛋白在两个治疗组明显表达,而Caspase-3、Bcl-2在两个治疗组肿瘤组织中无明显表达。结论:体外合成的FMNP粒子直径约40-50nm,分散性好,顺磁性强。对MSC具有较高的标记率,FMNP可以准确的进入到MSC细胞内部结构中。FMNP-MSC在体外培养中可以明显抑制肺癌A549细胞的增殖;FMNP-MSC可以诱导肺癌A549细胞呈凋亡改变,可以阻滞肺癌A549细胞的细胞周期;可以明显降低肺癌A549细胞的侵袭率。在体内,经尾静脉注射的FMNP-MSC可以准确的靶向到小鼠皮下移植肿瘤区域,在外加交变磁场作用下升温至有效温度,小鼠肿瘤的生长受到明显抑制,治疗后小鼠皮下移植肿瘤组织呈凋亡和坏死样改变,可能是通过增加Bax的表达来实现的。
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