论文部分内容阅读
目的:考察纳米活性炭( actived carbon nano-particles , ACN )对顺铂(Diamminedichloroplatinum,DDP)抗肿瘤作用的影响及其可能机制,在此基础上进一步考察不同制备工艺的纳米炭材料-炭气凝胶(Carbon aerogels,CAG)对顺铂抗肿瘤作用的影响。方法:采用MTT法及平板克隆形成法初步评价ACN和CAG对顺铂抑制人胃腺癌BGC823细胞生长的影响;建立S180肉瘤、H22肝癌、Lewis肺癌及B16黑色素瘤移植瘤模型,于荷瘤后前3天每天静脉注射给予顺铂或同时给予ACN和CAG,荷瘤10-15天后处死动物,考察ACN和CAG对顺铂抑制移植瘤生长的影响;采用3H-TdR掺入法考察ACN和CAG与顺铂合用对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响;采用ELISA法检测脾细胞培养上清IgG水平;采用流式细胞术检测T细胞亚群。结果:(1)ACN体外单独应用对BGC823细胞克隆形成无明显影响,与顺铂合用则能明显增强顺铂对BGC823细胞克隆形成的抑制作用。(2)在S180肉瘤模型上,通过一系列实验,最终选定实验条件为:顺铂剂量为2 mg/kg,ACN剂量为5 mg/kg。(3)在上述选定的实验条件下,观察到2 mg/kg的顺铂能明显抑制移植瘤生长,5 mg/kg的ACN能明显增强顺铂对S180肉瘤及H22肝癌生长的抑制作用,却明显减弱了顺铂对Lewis肺癌及B16黑色素瘤生长的抑制作用。我们考虑ACN的溶剂-血裂解液是否对顺铂的抑瘤作用有影响?下一步拟通过考察ACN及其溶剂-血裂解液对顺铂抑制肿瘤生长的影响以及对荷瘤小鼠免疫功能的影响以明确ACN减弱顺铂抑制Lewis肺癌及B16黑色素瘤生长的作用是否是由于其溶剂的原因。(4)研究表明,ACN的溶剂-血裂解液有减弱顺铂抑制S180肉瘤和H22肝癌生长的趋势,能明显减弱顺铂对Lewis肺癌生长的抑制作用;血裂解液能明显抑制Con A诱导的T细胞增殖以及LPS诱导的B细胞增殖,对脾细胞培养上清IgG水平也具有明显的抑制作用,血裂解液还可以使脾细胞中CD3+、CD4+细胞比例明显下降,CD8+细胞比例明显升高,从而使CD4+/CD8+比值明显下降,初步提示血裂解液可能通过抑制荷瘤小鼠的免疫功能从而促进了肿瘤生长,减弱了顺铂抑制肿瘤生长的作用。基于此,后续研究中ACN改用5%葡萄糖溶液作溶剂。(5)5 mg/kg的ACN能明显增强Con A诱导的T细胞增殖,明显升高脾细胞培养上清IgG水平,还能明显升高脾细胞中CD4+细胞比例,降低CD8+细胞比例,从而使CD4+/CD8+比值明显升高,初步表明ACN不仅能增强顺铂抑制肿瘤生长的作用,对荷瘤小鼠的免疫功能还具有一定的改善作用,改善免疫功能可能是其对顺铂抑制肿瘤生长增效作用的一个途径。(6)在上述工作的基础上,进一步考察了不同制备工艺的炭材料-炭气凝胶(CAG)对顺铂抑制S180肉瘤生长的影响以及对荷瘤小鼠免疫功能的影响,进而又在体外采用MTT法初步考察了炭气凝胶单独应用及与顺铂合用对BGC823细胞增殖的影响。结果表明,5 mg/kg的CAG-301不仅对顺铂抑制S180肉瘤生长具有较明显的增效趋势,还可以明显改善荷瘤鼠的免疫功能,表现为明显增强荷瘤鼠的脾细胞增殖能力、明显升高脾细胞培养上清IgG水平;体外研究结果表明,1-50μg/mL的CAG-301单独应用能抑制BGC823细胞增殖,25-50μg/mL的CAG-301与顺铂合用则能进一步抑制BGC823细胞增殖(与DDP组比较,P<0.05),初步提示CAG-301对细胞可能具有直接杀伤作用。结论:ACN和CAG能增强顺铂对肿瘤生长的抑制作用,并可以改善荷瘤小鼠的免疫功能,值得进一步深入研究。