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发酵与泡沫分离耦合过程中,菌体会吸附在气泡表面,造成反应体系中菌体含量减少、生产率降低,同时,在耦合过程中上升的泡沫会夹带发酵液流进泡沫收集器,从而造成发酵罐中营养的流失。
为了解决菌体吸附在气泡表面的问题,本文设计了一种新型载体κ-卡拉胶~丝瓜络来固定化细胞,该方法能将菌体包埋在载体中,同时可以实现固定化细胞的重复使用以及连续发酵。为解决消泡液过多的问题,本文开发了一种强化泡沫排液的“沙漏型”泡沫分离塔。同时选用乳酸乳球菌发酵耦合泡沫分离生产乳链菌肽(nisin)作为研究体系。
首先,对κ-卡拉胶~丝瓜络固定化乳酸乳球菌的操作条件进行了优化,确定最佳的固定化条件为卡拉胶浓度(3.0%)、氯化钾浓度(3.0%)、载体直径(0.4cm)、交联时间(30min)、菌悬液与卡拉胶体积比(1∶3)。然后通过批次发酵对比nisin效价变化,结果表明κ-卡拉胶~丝瓜络固定化乳酸乳球菌发酵生产nisin的效价较悬浮细胞发酵高,验证了κ-卡拉胶~丝瓜络固定化乳酸乳球菌发酵是可行的。随后通过κ-卡拉胶~丝瓜络固定化乳酸乳球菌进行重复批次发酵,确定κ-卡拉胶~丝瓜络可以重复5次,发酵时间可以持续100h,在批次发酵过程中nisin的效价在第三批次达到最大值(3.80×103IU/mL)。
其次,设计了一种“沙漏型”泡沫分离塔用于强化泡沫排液,分别从泡沫直径和持液量两方面研究了“沙漏型”泡沫分离塔强化泡沫排液的能力,结果表明“沙漏型”塔较直塔可以明显降低泡沫持液量,强化泡沫排液。
最后,采用κ-卡拉胶~丝瓜络固定化乳酸乳球菌发酵与“沙漏型”塔耦合生产nisin,研究了不同发酵方式对nisin效价的影响。在重复批次发酵过程中,当每一批次泡沫分离起始分离时间为第8h、7h、7h、7h、8h,间隔时间为50min、30min、30min、30min、40min时,可以获得单次中最大的效价。在连续固定化细胞发酵耦合泡沫分离过程中,最大的nisin效价为4.91×103IU/mL,相对于批次发酵过程nisin效价(3.30×103IU/mL)提高了48.8%。
为了解决菌体吸附在气泡表面的问题,本文设计了一种新型载体κ-卡拉胶~丝瓜络来固定化细胞,该方法能将菌体包埋在载体中,同时可以实现固定化细胞的重复使用以及连续发酵。为解决消泡液过多的问题,本文开发了一种强化泡沫排液的“沙漏型”泡沫分离塔。同时选用乳酸乳球菌发酵耦合泡沫分离生产乳链菌肽(nisin)作为研究体系。
首先,对κ-卡拉胶~丝瓜络固定化乳酸乳球菌的操作条件进行了优化,确定最佳的固定化条件为卡拉胶浓度(3.0%)、氯化钾浓度(3.0%)、载体直径(0.4cm)、交联时间(30min)、菌悬液与卡拉胶体积比(1∶3)。然后通过批次发酵对比nisin效价变化,结果表明κ-卡拉胶~丝瓜络固定化乳酸乳球菌发酵生产nisin的效价较悬浮细胞发酵高,验证了κ-卡拉胶~丝瓜络固定化乳酸乳球菌发酵是可行的。随后通过κ-卡拉胶~丝瓜络固定化乳酸乳球菌进行重复批次发酵,确定κ-卡拉胶~丝瓜络可以重复5次,发酵时间可以持续100h,在批次发酵过程中nisin的效价在第三批次达到最大值(3.80×103IU/mL)。
其次,设计了一种“沙漏型”泡沫分离塔用于强化泡沫排液,分别从泡沫直径和持液量两方面研究了“沙漏型”泡沫分离塔强化泡沫排液的能力,结果表明“沙漏型”塔较直塔可以明显降低泡沫持液量,强化泡沫排液。
最后,采用κ-卡拉胶~丝瓜络固定化乳酸乳球菌发酵与“沙漏型”塔耦合生产nisin,研究了不同发酵方式对nisin效价的影响。在重复批次发酵过程中,当每一批次泡沫分离起始分离时间为第8h、7h、7h、7h、8h,间隔时间为50min、30min、30min、30min、40min时,可以获得单次中最大的效价。在连续固定化细胞发酵耦合泡沫分离过程中,最大的nisin效价为4.91×103IU/mL,相对于批次发酵过程nisin效价(3.30×103IU/mL)提高了48.8%。