苹果品种及砧木高效脱毒技术体系的建立

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苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎痘病毒(ASPV)和苹果锈果类病毒(ASSVd)是苹果果树上4种重要病毒,广泛分布于世界各苹果产区,导致果树生长势和果实的产量及品质明显下降,至今没有高效的防治方法,进行无病毒苗木的繁育是目前唯一的有效措施。传统的主要脱毒方法是恒温热处理,该方法的脱毒效率较低,获得的脱毒品种有限,为改进传统的脱毒方法,提高脱毒率,本试验以烟台地区主栽苹果品种和砧木为试材,分别采用热处理+茎尖培养、化学处理+茎尖培养以及超低温处理+茎尖培养的方法对其进行脱毒处理,以RT-PCR技术为检测手段,对3种处理方法的脱毒效果作出评价,从而建立针对不同品种和砧木的高效脱毒技术体系。主要结果如下:1.通过对不同品种和砧木进行初代培养,建立其无菌体系,探究了Hgcl2消毒时间对植株成活率的影响,确定了2001、红将军和烟富10号的Hgcl2最佳消毒时间为11min,其成活率在68%以上;烟砧1号、烟砧2号和烟砧3号的消毒时间为12min,成活率在70%以上;烟富8号的消毒时间为10min,成活率达90%;烟富6号的Hgcl2最佳消毒时间是13min,成活率为75%。2.获得了不同品种和砧木的茎尖培养、继代培养和生根培养的培养基配方。适于2001、红将军、烟富8号、烟富10号和烟富6号的茎尖培养基配方是MS+6-BA2.5mg/L+IBA0.5mg/L+5.3g/L琼脂+30g/L蔗糖,pH5.8;适于烟砧1号、烟砧2号和烟砧3号的茎尖培养基是MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.4mg/L+5.3g/L琼脂+30g/L蔗糖,pH5.8;离体植株继代培养的培养基配方为MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.1mg/L+5.3g/L琼脂+30g/L蔗糖,pH5.8;生根培养基为1/2MS+IAA1.5mg/L+IBA0.15mg/L+5.3g/L琼脂+20g/L蔗糖,pH5.8。3.通过对盆栽苗和试管苗进行变温热处理,发现不同品种和砧木对高温忍耐性不同,2001盆栽苗和试管苗的极限天数均大于60天,红将军、烟富8号和烟富10号的极限天数为60天,烟富6号和烟砧3号的极限天数是50天,烟砧2号是40天,而烟砧1号耐热性最差,极限天数仅为30天。4.经热处理+茎尖培养、化学处理+茎尖培养以及超低温处理+茎尖培养方法处理后,除烟富6号和烟砧1号的分化率都低于10%,其余品种和砧木的茎尖成活率和分化率均较高。5.通过比较分析不同处理的脱毒效果,结果表明,变温热处理对ACLSV的脱除率最高可达83.33%,化学处理ASGV和ASPV的脱除率均达到100%,超低温处理后ASSVd的脱除率最高可达75.61%。结合不同品种/砧木的不同病毒的脱毒率,为其搭配最佳处理组合。2001盆栽苗,变温热处理60d(ACLSV)+化学处理60d(ASGV、ASPV)+超低温处理(ASSVd);红将军盆栽苗,变温热处理60d(ACLSV)+化学处理60d(ASGV、ASPV)+超低温处理(ASSVd);烟富8号盆栽苗,变温热处理60d(ACLSV、ASPV)+化学处理60d(ASGV)+超低温处理(ASSVd);烟富10号盆栽苗,变温热处理60d(ACLSV)+化学处理60d(ASGV、ASPV)+超低温处理(ASSVd);2001试管苗,变温热处理30d(ACLSV)+化学处理60d(ASGV、ASPV)+超低温处理(ASSVd);烟砧2号试管苗,变温热处理30d(ACLSV)+化学处理60d(ASGV、ASPV)+超低温处理(ASSVd);烟砧3号试管苗,化学处理60d(ASGV、ASPV)+超低温处理(ASSVd)。
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