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活性氧（reactive oxygen species,ROS）在心血管疾病发生发展中具有重要作用。大量的实验结果表明，心肌细胞凋亡亦是活性氧所致心肌损伤的重要细胞机制之一。Smac／DIABLO是新发现的一种促凋亡分子。它正常时位于线粒体膜间间隙，在凋亡诱导因素的作用下，可释放入胞浆，依次激活Caspases-9，3，促进细胞凋亡发生。因此，Smac／DIABLO是凋亡线粒体信号传导通路中的重要调节分子。Smac／DIABLO在心肌组织中含量丰富，但活性氧是否导致心肌细胞Smac／DIABLO从线粒体释放以及它是否促进活性氧所致的心肌细胞凋亡发生，目前国内外均未见报道。热休克蛋白对细胞损伤具有保护作用，不少研究表明，多种热休克蛋白如HSP70、HSP90可在Caspase的上游或下游起作用，抑制凋亡的发生。但是，热休克蛋白是否通过干预Smac／DIABLO的释放或作用来抑制凋亡发生，目前还不清楚。 为探讨上述问题，我们采用活性氧过氧化氢（hydrogen peroxide,H2O2）处理C2C12肌原细胞建立细胞凋亡模型，并通过热休克预处理（42℃，1h，恢复12h）诱导热休克蛋白的表达，采用Hoechst 33258染色观察H2O2（0.5mmol／L）处理C2C12肌原细胞不同时间后细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率，DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性”梯状”条带，利用免疫荧光及细胞成分分离后蛋白质印迹分析H2O2是否导致Smac／DIABLO从线粒体释放，采用Caspase活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹分析Caspase-9，3的活化；转染Smac／DIABLO、HSP70基因，观察Smac／DIABLO、HSP70过表达对H2O2所致的C2C12肌原细胞Caspase-9，3的活化以及凋亡的影响。 结果发现，①H2O2处理1h后，Smac／DIABLO从C2C12肌原细胞 中南大学硕士学位论文 摘要线粒体释放入胞浆，Zh更明显；H刃。处理4h后，Caspase习，3开始活化，12h达高峰；HZO。处理 24h后，C厂；。肌原细胞显示特征性的凋亡形态改变，凋亡核百分率明显升高，DNA 电泳出现明显”梯状”条带。②热休克预处理可诱导 C0；。肌原细胞中 HSP90，HSP叩及。B。晶状体蛋白的表达增高，可抑制SmaC／DIABLO释放、Caspase习，3的活化及细胞凋亡的发生。③与单纯过氧化氢损伤组相比，Smac0IABLO过表达＋过氧化氢损伤组 Caspase习，3的活化、凋亡核百分率的升高及”梯状”条带的出现均更明显；④将Smac／DIABLO与HSP70共转染后，发现HSP70过表达可明显减轻HZO。所致、Smac所促的 C。C1。肌原细胞凋亡，表现为与空载体＋H。O。损伤组以及 Smac过表达＋H0。损伤组相比，Caspase子，3活化减少，凋亡细胞减少，DNA电泳未出现明显”梯状”条带，凋亡核百分率明显降低；⑤HSP70过表达可抑制HZOZ所致的CZC12肌原细胞Sin砒从线粒体向胞浆的释放。 上述结果表明，①线粒体信号通路在HZOZ所致的C2C12肌原细胞凋亡中发挥重要作用；②HZOZ导致Smac／DIABLO从CZC12肌原细胞线粒体释放，线粒体Smac的释放促进Caspase习，3的活化及细胞凋亡的发生；③热休克预处理可抑制H刃。所致的Smac＊IABLO从线粒体向胞浆释放、Caspase习，3的活化及细胞凋亡；④HSP70可通过抑制 Smac从线粒体的释放来抑制 H。O。所致的 C＃。肌原细胞凋亡。