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目前,常规酶联免疫反应体系普遍存在灵敏度、稳定性、特异性不够完善等问题,而咪唑类离子液体作为绿色反应介质可改善和提高酶反应的活性、稳定性和立体选择性。本课题以辣根过氧化物酶(HRP)为研究对象,通过筛选结构和性质上呈规律性递变的对称性咪唑离子液体,应用于辣根过氧化物酶催化反应,筛选出能够促进HRP活性的友好型离子液体,将其应用于吐毒素酶联免疫检测介质体系中,与传统不含该液体的免疫检测体系相比,该离子液体的介入能够提高酶联免疫检测的灵敏度、重现性等特性。首先,研究了辣根过氧化物酶(HRP)在含有三种离子液体1-正丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸、1-异丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸([i-Bmim]BF4)及1-仲丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸体系中的反应特性。结果发现,HRP在含适量[i-Bmim]BF4(浓度变化范围0.0035g/ml ~0.017g/ml)体系中的催化活性及稳定性高于其他体系;反应温度和pH对含离子液体的反应介质中酶活力的影响规律与不含离子液体时的规律相似。与不含该离子液体的反应介质相比,HRP在含[i-Bmim]BF4的体系中催化反应的最大反应速率(Vmax)和米氏常数(Km)均升高。其次,通过EDC法合成DON完全抗原,DON与BSA的初始摩尔比为70:1,得到DON完全抗原中DON与BSA的摩尔比为11.8:1。通过红外光谱扫描以及ELISA实验验证了DON-BSA的偶联成功。用DON-BSA免疫新西兰大白兔,得到抗体的最高效价为51200。利用间接竞争免疫方法得到最佳抗原抗体工作浓度分别为1:100和1:6400,进一步得到其IC50值为549.5ng/ml。最后,将[i-Bmim]BF4离子液体应用于DON酶联免疫检测。结果表明,当体系中该离子液体的浓度为0.014g/ml时,其IC50值为331.1ng/ml,比不含该液体时灵敏度提高了约39.7%;测定体系中离子液体浓度为0和0.014g/ml时各孔的的重现性试验,两者的变异系数分别为3.99%和1.14%,表明离子液体的介入提高了反应的重现性。另外,做了啤酒样品的加标回收实验,当体系中含有[i-Bmim]BF4浓度为0.014g/ml时,其样品加标回收率为93.1%~98.6%,变异系数平均值为5.0%,比不含离子液体时提高了约十个百分点。