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目的:分析总结3例遗传性凝血因子XⅢ缺陷症患者的临床与实验室特征,明确基因突变位点,并通过定点诱变及体外真核表达系统探讨凝血因子XⅢ缺陷的分子机制。方法:1.FXⅢ荧光检测试剂盒检测患者血浆中FXⅢ的活性。2.ELISA和Western blot检测患者血浆中FXⅢA2B2,FXⅢ-A,FXⅢ-B的蛋白水平。3.PCR扩增FXⅢ-A基因外显子及其侧翼序列并测序分析基因突变位点。4.采用定点诱变技术构建突变型FXⅢ-A质粒。5.培养COS7细胞,瞬时转染野生型和突变型FXⅢ-A质粒,RT-PCR检测FXⅢ-A的m RNA含量,同时Western blot检测转染后细胞上清及细胞裂解液内FXⅢ-A的蛋白表达水平。6.共聚焦显微镜检测野生型与突变型的FXⅢ-A在内质网和高尔基体的亚细胞定位,分析不同突变体的共定位及Pearson’s相关系数。结果:1.FXⅢ荧光检测结果显示随着反应的进行正常人反应体系的荧光强度逐渐升高,而FXⅢ缺陷患者的反应体系中荧光强度上升不明显甚至恒定,表明患者血浆中FXⅢ活性比正常人明显降低。2.ELISA检测发现与正常人相比,FXⅢ缺陷患者中FXⅢA2B2抗原下降。Western blot检测结果表明FXⅢ缺陷患者中FXⅢ-B抗原表达与正常人相比无差异,而FXⅢ-A抗原相比正常人均有明显下降,诊断缺陷类型为I型FXⅢ-A缺陷。3.PCR检测到3例患者分别存在突变位点,患者1:c.G688C,c.A2273G分别导致W188C,H374R。患者2:c.A1798C,c.del723-6 AGAA分别导致T559P,R202Fs 206 ter。患者3:c.T1944C导致H717R。4.分别采用定点诱变与大引物方法构建四个错义突变质粒(W188C,H374R,T559P,H717R),DNA测序验证突变载体构建成功。5.RT-PCR检测突变体FXⅢ-A的m RNA表达水平与野生型无差异,Western blot检测发现细胞裂解液中野生型与突变型均表达FXⅢ-A蛋白,但有不同程度的降低,而浓缩上清中只有野生型表达FXⅢ-A蛋白,突变体均不表达FXⅢ-A。6.共聚焦显微镜检测证实突变型FXⅢ-A可在内质网表达,而高尔基体无表达,提示突变蛋白可正常合成但滞留在内质网不能运输到高尔基体向细胞外分泌。结论:1.该3例凝血因子XⅢ缺陷症是由于FXⅢ-A基因W188C,H374R,T559P,H717R及R202 Fs 206 ter突变所致,引起血浆中凝血因子FXⅢ-A蛋白含量减少。2:FXⅢ-A基因W188C,H374R,T559P,H717R突变后导致FXⅢ-A蛋白能在内质网正常合成,不能进入高尔基体加工,导致细胞分泌减少引起血浆中FXⅢ-A减少,引起I型凝血因子XⅢ缺陷症。