丙泊酚对豚鼠胃窦平滑肌细胞L型钙离子通道的作用

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目的:研究丙泊酚对豚鼠胃窦平滑肌细胞膜L-型钙离子通道电流(ICa2+)的影响,探讨丙泊酚对胃肠动力的影响。方法:采用传统全细胞膜片钳技术,记录正常豚鼠胃窦平滑肌细胞膜L-型ICa2+,换Ba2+做载流子后,记录Ba2+电流(IBa2+)。对照组采用丙泊酚的溶媒成分10%脂肪乳,用Ba2+-PSS稀释成与78μg/ml丙泊酚同等浓度后灌流细胞,观察IBa2+变化,然后洗脱,记录电流图。丙泊酚组分为低浓度(2μg/m1)和高浓度(78μg/m1)组。待正常IBa2+稳定后用低浓度丙泊酚溶液灌流细胞,观察电流随时间的变化,然后洗脱,观察跨膜电流是否恢复。同样,在用高浓度丙泊酚溶液灌流细胞时观察记录跨膜IBa2+的变化,然后洗脱,观察IBa2+是否恢复。每组均应完整记录三例以上。结果:首先用Ca2+-PSS灌流细胞,细胞膜电位钳制在-80mV,脉冲电压从-60mV开始,去极化刺激到+60mV,阶跃电压10mV,持续时间400ms,引出Ca2+电流(ICa2+)。ICa2+在-30 mV--20mV出现,在0 mV达到最大值,电流峰值为(-63.62±19.46)pA,反转电位在+40mV左右出现。然后用Ba2+加载,记录Ba2+电流(IBa2+),IBa2+与ICa2+特点相同,也是在-30 mV--20mV出现,在0 mV达到最大值,电流峰值增大到(-286.63±51.57)pA,反转电位在+40mV左右出现。持续用Ba2+-PSS灌流细胞,待IBa2+稳定后用与78μg/ml丙泊酚等容积的10%脂肪乳灌流细胞,观察到IBa2+没有显著变化。持续用Ba2+-PSS灌流细胞,膜电位钳制在-80mV,每间隔10s给予细胞一次0mV电压的单刺激,持续时间400ms,引发出IBa2+,待电流稳定后用2μg/ml丙泊酚溶液灌流细胞,药物灌流开始后IBa2+先轻微增大,持续约30s,然后IBa2+逐渐减小。药物灌流开始后170s左右IBa2+趋于稳定,稳定时IBa2+减小到电流最大值的(66.32±4.41)%。待变化稳定后用Ba2+-PSS洗脱药物,电流大小立即开始恢复,恢复电流为加药前电流最大值的(91.83±1.24)%(n=4)。用78μg/ml丙泊酚溶液灌流细胞,给细胞施加同样的单刺激,IBa2+随时间逐渐减小,灌流开始后约190s稳定,稳定时IBa2+减小到电流最大值的(75.63±3.51)%。然后用Ba2+-PSS洗脱药物,电流仍然能大部分恢复,恢复电流为加药前电流值的(94.58±3.19)%(n=3)。结论:全细胞膜片钳实验表明,亚催眠剂量的丙泊酚抑制豚鼠胃窦平滑肌细胞跨膜钙离子内流,导致细胞内钙离子浓度降低,这可能是亚催眠剂量丙泊酚导致胃肠道平滑肌收缩力减弱、进而导致胃肠动力减慢的原因之一。
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