异尖线虫是一种水生食源性寄生线虫,主要寄生于海洋的各种鲸类和鳍足类动物,广泛分布于世界各海域。异尖线虫可引起重要的人兽共患寄生虫病—异尖线虫病（anisakiasis）,人主要由于食用了生的或未煮熟的含有异尖线虫幼虫（L3）的海产品而感染。异尖线虫病临床主要表现为咽喉水肿、过敏反应、荨麻疹、哮喘、胃肠炎症等,同时由于人不是异尖线虫的最适宿主,所以异尖线虫感染人后经常发生异位寄生的现象,从而造成胃肠穿孔、腹膜炎、肝炎等症状,甚至会危及生命。由于异尖线虫病没有特定的临床症状,所以临床对异尖线虫病的确诊存在着诸多不确定性,即使在日本等异尖线虫病确诊率较高的国家,也存在很高的误诊率。已报道可引起人异尖线虫病的异尖科线虫主要有7类,分别为简单异尖线虫（Anisakis simplex）、典型异尖线虫（A.typica）、派氏异尖线虫（A.pegreffii）、抹香鲸异尖线虫（A.physeteris）、伪地新线虫（Pseudloterranova decipiens）、对盲囊线虫（Contracaecum SPP.）和宫脂线虫（Hysterothylacium SPP.）,我国于2013年报道首例异尖线虫病。近年来国内对海产品的的需求量不断地增加,同时由于人们饮食结构的改变,对于腌制品、寿司、生鱼片等一系列的食用越来越多,导致异尖线虫病的发病率逐年升高。目前鉴定异尖科线虫的方法主要有荧光定量PCR、LAMP、免疫学诊断方法ELISA、Western Blot等,但由于依赖于昂贵的仪器设备,存在操作繁琐耗时长、假阳性等弊端,因此开发新的异尖线虫特异性快速诊断与检测方法,了解我国沿海鱼类感染异尖线虫的种类及流行情况,对异尖线虫病的防控和治疗具有重要的意义。本研究首先对我国渤海、黄海、东海、南海沿海城市海鱼的异尖线虫感染情况进行了调查。共调查了21座城市32种海鱼,获得了2550条异尖科线虫。通过提取线虫基因组,利用PCR-RFLP技术及ITS区序列测序比对,对所获线虫分类鉴定。共鉴定出3个属的5种异尖科线虫,分别是派氏异尖线虫（A.pegreffii）、简单异尖线虫（A.simplex）、典型异尖线虫（A.typica）、宫脂线虫（Hysterothylacium SPP.）、对盲囊线虫（Contracaecum SPP.）。同时,本研究对已报道的可引起人异尖线虫病的7种线虫的ITS区基因序列进行分析,构建了可检测7种线虫的通用PCR方法。设计了三对引物并进行筛选,对该方法的退火温度、特异性、灵敏性以及人工污染重复性进行了评价。结果显示退火温度对反应结果影响不大,最终以55℃的退火温度完成后续的实验。可特异性的检测出异尖科线虫,而阔节裂头绦虫、华支睾吸虫、东方次睾吸虫、棘颚口线虫和双蒸水的检测结果均为阴性,灵敏度达到1 pg/μL。人工污染实验结果显示每20 g、50 g、100 g海鱼样品混入1 mg虫体组织搅碎机搅碎混匀随机采样提取基因组,均可检测到目的片段,且重复性良好,说明在实际样品中检验具有可行性。最后,本研究利用重组酶聚合酶扩增技术（Recombinase Polymerase Amplification,RPA）建立了异尖科线虫快速可视化检测方法。根据7种线虫的ITS区基因序列作为靶序列,设计了八对引物并进行筛选,在加入SYBR Green I对RPA扩增产物进行可视化检测。对该方法的温度、时间、特异性、灵敏性、以及人工污染重复性进行了评价。结果显示此方法在35℃条件下扩增10 min,加入2μL的50×的SYBR Green I,通过395 nm波长的紫外灯照射,即可实现可视化检测,灵敏度达到1 pg/μL,可特异性的检测出异尖科线虫,而阔节裂头绦虫、华支睾吸虫、东方次睾吸虫、棘颚口线虫和双蒸水的检测结果均为阴性。人工污染实验结果显示每20 g、50 g、100 g海鱼样品混入1 mg虫体组织搅碎机搅碎混匀随机采样提取基因组,均可检测到目的片段,且重复性良好,可视化结果与电泳结果一致,说明在实际样品中检验具有可行性。同时,该方法无需昂贵仪器,且具有检测时间短和操作简便等优势,可以真正实现便携式的异尖科线虫快速核酸检测或诊断。综上所述,本研究不仅丰富了我国沿海地区海鱼异尖线虫感染情况的流行病学资料,而且还为异尖线虫的诊断和防控提供有力的技术支持。