mTOR信号通路调控细胞的生长、增殖和分化,Rheb和FKBP38是该通路中两个重要的调节蛋白。Rheb是Ras超家族的一员,它是mTOR信号通路中的上游调节因子,具有整合营养和促细胞分裂信号的功能；FKBP38是免疫亲和素FKBP家族中的一员,可与mTOR结合抑制其活性,从而调节细胞生长。2007年首次报道Rheb通过FKBP38调节mTOR活性,即Rheb通过与FKBP38结合释放mTOR而使其具有活性;之后又有研究者采用不同的方法证明Rheb与FKBP38没有相互作用,各实验室的研究报道出现不同的结论。值得指出的是,以上研究报道都是采用人细胞为材料的,关于绒山羊胎儿成纤维细胞中Rheb和FKBP38的研究尚未见报道。为了探讨Rheb和FKBP38之间的相互关系,我们在已有报道的基础上,采用蛋白质组学技术探讨绒山羊胎儿成纤维细胞中Rheb和FKBP38之间的相互作用关系,以期通过新技术和新材料的应用为二者之间关系的研究提供新的佐证,同时为绒山羊胎儿成纤维细胞中mTOR信号通路的研究提供数据。本研究首先利用RT-PCR克隆绒山羊Rheb和FKBP38基因cDNA的CDS区,分析其表达模式；构建真核表达载体共转染绒山羊胎儿成纤维细胞(GFb),通过免疫共沉淀和Western-Blot鉴定蛋白Rheb和FKBP38的共同存在；最后利用酵母双杂交技术并结合免疫共沉淀结果确定Rheb与FKBP38的相互作用关系。结果表明,内蒙古白绒山羊Rheb基因ORF全长555bp,编码184个氨基酸(HM569224),该基因在脑组织中表达量较高,在心脏组织中表达量较低；得到的FKBP38基因cDNA全长1248bp,包含了1236bp的ORF,编码411个氨基酸(JF714970),该基因在睾丸组织中表达量较高,在肾脏组织中表达量较低。利用得到的基因构建真核表达载体pIRES2-EGFP-Rheb和pIRES2-DsRed2-FKBP38,共转染GFb细胞,G418筛选两周后提取蛋白进行免疫共沉淀和Western-Blot鉴定,结果在免疫共沉淀复合物中鉴定出Rheb与FKBP38,利用所得基因成功构建酵母双杂交诱饵表达载体pGBKT7-Rheb、 pGBKT7-FKBP38和靶载体pGADT7-Rheb、pGADT7-FKBP38,结果显示Rheb与FKBP38具有相互作用关系。综合免疫共沉淀和酵母双杂交结果,可以认为二者可以发生直接相互作用。本文通过蛋白质组学研究证明了在绒山羊胎儿成纤维细胞中Rheb与FKBP38之间存在直接的相互作用关系,为二者之间关系研究提供了新的佐证,结果丰富了Rheb和FKBP38的基因及其产物的遗传及功能信息,为阐明绒山羊胎儿成纤维细胞中mTOR信号通路的功能与作用机制提供科学依据。