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目的:本研究以鱼藤酮诱导的PD模型大鼠作为研究对象,在中医理论的指导下,选择风府、太冲穴进行电针治疗,以促进α-syn的清除为切入点,观察电针治疗对PD大鼠黑质HDAC6、LC3-Ⅱ表达的影响,探讨电针治疗PD的可能作用机制,为针刺防治PD提供部分实验依据。方法:将60只SPF级健康雄性SD大鼠,体重为(200±20)g,适应性喂养2周后,按随机数字表法抽取24只大鼠并随机分配为正常组和假手术组,各12只,余下大鼠均用于制备PD模型(将鱼藤酮粉末充分溶于葵花油乳液中,浓度为2mg/ml,按2mg/Kg/d规格在大鼠颈背部皮下注射鱼藤酮,1次/d,连续28d)。造模结束后,观察所有造模大鼠的外观及行为学表现,参照陈忻等制定的行为学评分标准进行评分,分数为2-8分的大鼠视为造模成功。最后排除不合格大鼠,将24只造模成功大鼠随机分为PD组和PD电针组,各12只。假手术组大鼠采用同样的注射方法在大鼠颈背部皮下注射等规格的不含鱼藤酮的葵花油乳液,1次/d,连续28d。正常组不作任何处理。PD电针组大鼠采用0.3mm×13mm不锈钢毫针针刺“风府、太冲”穴进行治疗,其中两侧太冲穴隔天交替使用,接HANS-200电针治疗仪,参数设置为连续波,2Hz,1mA,以大鼠肢体有轻微抽动为度,20min/次,1次/d,7d为一个疗程,连续治疗4个疗程。正常组、假手术组以及PD组大鼠也于每天相同的时间抓取固定,但不施加治疗。治疗结束后对各组大鼠进行行为学评分并比较结果。行为学评分结束后次日对各组大鼠进行取材,其中每组半数切片处理,半数匀浆处理。采用免疫组化法观察各组大鼠黑质TH、α-syn免疫组化阳性表达情况,并采用IPP6.0软件分析各自阳性神经元的平均光密度值并进行比较;采用免疫蛋白印迹法(Western blot)检测各组大鼠黑质HDAC6、LC3-Ⅱ蛋白的表达并进行比较;运用实时荧光定量法(RT-PCR)检测各组大鼠黑质HDAC6mRNA、LC3-ⅡmRNA相对表达量并进行比较。结果:(1)与正常组、假手术组比较,PD组大鼠行为学评分明显升高(P<0.01);治疗4周后,PD电针组大鼠外观及行为学表现较PD组大鼠得到改善,行为学评分明显下降(P<0.01);正常组、假手术组大鼠均未见明显行为学异常表现。(2)与正常组、假手术组比较,PD组大鼠黑质TH免疫反应减弱,平均光密度值明显降低(P<0.01);与PD组比较,PD电针组大鼠黑质TH免疫反应增强,平均光密度值明显增加(P<0.01)。(3)与正常组、假手术组比较,PD组大鼠黑质α-syn免疫反应增强,平均光密度值明显增加(P<0.01);与PD组比较,PD电针组大鼠黑质α-syn免疫反应减弱,平均光密度值明显降低(P<0.01),正常组、假手术组未见明显α-syn聚集。(4)与正常组、假手术组比较,PD组大鼠黑质HDAC6、LC3-Ⅱ蛋白表达增加(P<0.05);与PD组比较,PD电针组大鼠黑质HDAC6、LC3-Ⅱ蛋白表达显著增加(P<0.01)。(5)与正常组、假手术组比较,PD组大鼠黑质HDAC6 mRNA、LC3-ⅡmRNA相对表达量增加(P<0.05);与PD组比较,PD电针组大鼠黑质HDAC6mRNA、LC3-ⅡmRNA相对表达量显著增加(P<0.01)。结论(1)本实验研究进一步验证了颈背部皮下注射鱼藤酮法可有效复制PD大鼠模型。(2)电针治疗能明显改善PD大鼠的外观及行为学表现。(3)电针治疗可显著增加PD大鼠黑质TH的含量,表明其可一定程度上改善DA能神经元的活性。(4)电针治疗可显著减少PD大鼠黑质α-syn聚集,从而减轻对DA能神经元的毒性作用。(5)电针治疗可显著上调PD大鼠黑质HDAC6mRNA、LC3-ⅡmRNA及其蛋白的相对表达水平,这可能是电针促进异常聚集的α-syn清除的关键,可能与上调HDAC6水平增强了自噬活性,促进了α-syn的降解有关。