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研究背景:胃癌在我国各种恶性肿瘤中发病率居高,早期诊断率仍较低导致胃癌患者的预后不良。MicroRNA被报道促进或者抑制多种肿瘤的发生发展。miR-214异常表达于很多肿瘤中,在本研究通过生物信息学分析,筛选出miR-214胃癌预后相关,预测下游靶基因为TET3。增殖、迁移、双荧光素酶报告基因实验进一步验证该机制。深入探讨miR-214在胃癌的生物学功能及机制,有望成为预测胃癌进展、转移及疗效检测、预后评估的生物学标志物之一。本博士论文由以下四个部分内容组成:第一部分胃癌组织中miRR214表达及与临床病理和预后关系研究1、目的:检测miR-214在胃癌组织及癌旁组织中的表达情况并分析与临床病理参数的关系。2、方法:RT-PCR检测100例胃癌组织及癌旁中miR-214的表达情况,并分析其与临床病理参数、预后的关系。3、结果:胃癌组织中miRNA-214与癌旁对照组织比较,表达水平明显升高,且预后不良。单因素分析显示,神经浸润、Borromann分型、TNM分期及miR-214表达均是影响胃癌患者预后的相关因素(P<0.05),而TNM分期是影响胃癌患者预后的独立因素(P<0.05)。4、结论:miR-214在胃癌组织中表达上调,与胃癌肿瘤预后相关,有望成为胃癌中可靠的分子标志物。第二部分miR-214在胃癌细胞生物学功能研究1、目的:探究miR214在胃癌增殖、凋亡、迁移、侵袭等过程中的细胞功能意义。2、方法:以miR-214 inhibitor,mimics,mimics-NC或inhibitor-NC转染SNU-16、SNU5胃腺癌细胞,分别检测细胞增殖、迁移、凋亡情况。慢病毒感染SNU-16细胞构建miR-214过表达的稳转细胞株,进行裸鼠皮下成瘤实验。3、结果:miR214过表达组细胞增殖能、迁移力、成瘤能力明显增加,miR214干扰组减弱。4、结论:MiR-214失调影响了胃癌细胞的增殖、迁移。第三部分mir214调节胃癌下游靶基因的筛选与靶基因功能验证1、目的:寻找mir214靶基因,探讨靶基因在胃癌的作用及意义。2、方法:Starbase2.0预测mir214下游靶基因。提取TCGA数据库胃癌样本分析相关性分析和GSEA富集。Kaplan-meierplotter数据库(http://www.http://kmplot.com)中整理靶基因在胃癌预后。String分析相关蛋白互作。过表达TET3基因进行细胞功能验证和裸鼠皮下成瘤动物实验。3、结果:mir214与预测的靶基因TET3负相关,且TET3基因与胃癌的预后高度相关,富集在多条肿瘤相关信号通路。进一步实验结果表明,过表达TET3后,胃癌细胞增殖、迁移、成瘤能力减弱。4、结论:TET3基因表达失调与胃癌的生存预后相关,在胃癌中低表达促进胃癌的进展。第四部分miR-214与TET3基因表达及其功能关系1、目的:探讨miR214与TET3基因作用机制,以及二者在胃癌增殖、迁移、侵袭等过程中的细胞功能意义。2、方法:以mimics,mimics-NC,miR-214 inhibitor或inhibitor-NC转染SNU-16、SNU5胃腺癌细胞,检测胃癌细胞内TET3 mRNA和蛋白表达水平的变化。共转染功能回复实验验证miR-214与TET3的调控关系,其中验证的功能回复实验包括CCK8增殖实验,EDU增殖实验,transwell迁移实验。双荧光素酶报告基因实验验证miR-214与TET3的结合区域。3、结果:miR-214 mimics组胃癌细胞内TET3的mRNA和蛋白表达水平降低;而转染miR-214 inhibitor组胃癌细胞内TET3增高。共转染功能回复实验结果显示,TET3的过表达部分拮抗了miR-214对细胞株增殖、迁移能力的促进作用。荧光素酶报告基因实验显示miR-214过表达使野生型TET3的3’UTR区荧光素酶的活性减少了接近2倍,而在突变型未见明显变化。4、结论:MiR-214通过调控TET3的3’UTR区域促进了胃癌细胞的增殖、迁移。