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目前畜禽肉食品中动物源性成分的鉴别检测已涉及到肉食品的工业、贸易、市场、餐饮业等领域。针对目前我国畜禽类肉食品和饲料市场贸易中畜禽源性成分检验检疫中的迫切需要,本试验开展了鸭mt-DNA细胞色素C氧化酶Ⅲ(COⅢ)基因的克隆和PCR-mtDNA技术鉴别检测肉食品、饲料中鸭源性成分的研究。试验以鸭肌肉组织DNA为模板,利用PCR-mtDNA技术成功克隆出了鸭mtDNA COⅢ基因(Genebank accession:DQ655706详见附录三),对所克隆的序列分析表明,其序列包括鸭细胞色素C氧化酶Ⅲ(COⅢ)基因全序列784bp(含一个起始密码子ATG和一个不完全终止密码子T),以及3’端下游的ATPase6基因和5’端上游的tRNA-Gly基因。通过同源性分析可知,动物的线粒体DNA COⅢ基因是相对保守的,因此可以利用他们之间的同源性差异进行分子进化方面的分析。从核苷酸和氨基酸序列构建的分子系统进化树来看,两者在结构上基本一致,仅仅物种间的距离有所变化。鸭mt-DNA细胞色素C氧化酶Ⅲ(COⅢ)基因的克隆和序列分析,为研究PCR-mtDNA技术鉴别检测肉食品、饲料中鸭源性成分奠定了基础。利用BLAST软件、Bioedit软件分析mtDNA序列,根据鸭mtDNA COⅢ基因的特异性,设计PCR-mtDNA方法鉴别检测鸭源性成分的特异性引物。以各种动物肌肉组织及饲料DNA为模板进行PCR扩增、经反复验证筛选出只能扩增出鸭DNA的目的片段,而不能扩增出其它动物DNA片段的特异性强、稳定性好的引物P3(5′- CTCATCTATCCTGCTAGCCGC-3′)、P4(5′-TACCAACCCCCGAACTA GGC-3′);利用此引物PCR扩增鸭DNA的特异性片段为226bp,对PCR产物进行测序分析可知与已克隆的鸭mtDNA COⅢ基因同源性达到100%,证明了所筛选引物的准确性。通过对不同含量的DNA模板溶液(浓度分别为10%、2%、1%、0.02%、0.01%、0.002%、0.001%)进行PCR扩增的方法,对筛选出的特异性引物P3、P4进行灵敏度试验,结果分析表明灵敏度约为0.001%,证明该PCR方法具有特异性强、灵敏度高的特点,完全可作为鉴别肉食品和饲料中鸭源性成分的方法。