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目的:构建携带有RNA干扰片段的腺病毒载体Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP,在体外,观察其对人结肠癌LOVO细胞株VEGF-C表达的抑制效果;在体内,探讨人结肠癌BALB/c裸鼠皮下瘤模型瘤内注射腺病毒载体Ad5F35-VEGF-CsiRNA-EGFP对肿瘤生长及瘤内淋巴管生成的抑制效果。方法:体外实验:选择针对人VEGF-C mRNA的特异性siRNA靶序列,设计合成其相应的双链DNA,利用BamHⅠ、HindⅢ双酶切插入pDC316-EGFP-U6载体后构建穿梭质粒pDC316-VEGF-C siRNA-EGFP-U6,再与骨架质粒pBHGF35共转染293细胞,同源重组,酶切鉴定,包装扩增后得到重组腺病毒Ad5F35-VEGF-CsiRNA-EGFP-U6,Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP-U6转染人结肠腺癌LOVO细胞,观察细胞形态变化,荧光显微镜下计算腺病毒转染效率,采用逆转录聚合酶链反(RT-PCR)和蛋白印迹(Western-blot)分别从mRNA和蛋白质水平检测其对VEGF-C表达的抑制效果;体内实验:裸鼠皮下注射LOVO细胞构建人结肠癌皮下瘤模型24只,随机分为4组(每组6例),以腺病毒、空病毒、裸siRNA以及PBS分别进行瘤内原位注射干预,计算肿瘤体积变化并绘制生长曲线,使用抗CD34单抗和抗LYVE-1单抗分别染色瘤内的血管和淋巴管,检测瘤内血管和淋巴管生成情况,并计算微血管密度(MVD)、微淋巴管密度(LVD)。结果:体外实验:成功构建重组腺病毒Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP-U6,纯化后获得7.9×1O~9 IU/ml滴度的病毒,当感染复数(MOI)为100时达转染效率最大化,腺病毒对LOVO细胞的转染效率(绿色荧光细胞/总细胞数)约92%±4.6%,转染LOVO细胞48小时后达mRNA最大抑制效率,使VEGF-C mRNA表达下降为对照组的30.7%±1.2%(P＜0.05);VEGF-C蛋白的表达也明显受到抑制,转染72小时后出现蛋白最大抑制效率,下降为对照组的47.8%±2.2%(P＜0.05);体内实验:腺病毒组肿瘤体积明显小于其他各组,腺病毒组与PBS对照组LVD分别为8.47±2.1,17.35±4.7(p＜0.05),腺病毒组与PBS对照组MVD分别为22.65±6.04,23.19±7.63(p＞0.05)。结论:本实验设计并合成的腺病毒载体介导的VEGF-C siRNA在体外可显著抑制人结肠癌细胞VEGF-C mRNA和VEGF-C蛋白的表达;在人结肠癌裸鼠移植瘤模型中,瘤内注射腺病毒载体能显著抑制移植瘤的生长和肿瘤淋巴管生成,而对肿瘤血管生长无显著影响。