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目的检测蛋白质磷酸酶2A (protein phosphatae 2A, PP2A)的癌性抑制因子(Cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A, CIP2A)在正常胃黏膜、癌前病变及胃癌组织中的表达,分析CIP2A、c-Myc和核增殖抗原Ki-67在胃癌组织中表达的关系,探讨CIP2A与胃癌临床病理因素的关系以及三者在胃癌发生发展中的作用和意义。方法临床病理资料及组织芯片制作：收集中国医科大学附属第一医院外科手术切除胃癌组织159例,配对正常胃黏膜97例(距癌灶边缘大于5cm处切取作为对照),慢性萎缩性胃炎45例,肠上皮化生50例及异型增生28例。常规组织蜡块行4μm组织切片,常规HE染色,用于目标组织的定位。采用组织芯片制作仪构建胃癌及癌前病变组织芯片蜡块,行4μm连续切片。另取23例胃癌患者的新鲜胃癌组织及配对正常胃粘膜样本(距癌灶边缘大于5cm)用于蛋白免疫印迹(Western blot)检测CIP2A蛋白的表达。免疫组化染色及判定方法：采用PV9000免疫组化二步法检测胃癌及癌前病变中CIP2A、c-Myc和Ki-67的表达。兔抗人CIP2A多克隆抗体(工作浓度为1：180)购自美国NOVUS公司,鼠抗人c-Myc单克隆抗体(工作液)及鼠抗人Ki-67单克隆抗体(工作液)均购自福州迈新生物公司。PV9000免疫组化检测试剂盒和氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒购自北京中杉生物有限公司。采用柠檬酸修复液(pH6.0)高温高压修复抗原,PBS替代一抗做阴性对照。结果判定方法：CIP2A蛋白阳性反应为棕黄色颗粒定位于细胞浆和细胞膜,c-Myc蛋白阳性反应为棕黄色颗粒定位为细胞核和细胞浆,Ki-67蛋白反应阳性为棕黄色颗粒定位于细胞核。每个病例由两位观察者采用盲法随机选择2个高倍视野,计数200个细胞,染色强度(A)以阳性细胞呈色反应为准：无特异性着色为0分,浅棕色为1分,棕黄色为2分,深棕色为3分；染色的阳性细胞所占比例(B)按下列标准评定记分：阴性细胞或弱阳性细胞<5%为0分,阳性细胞占5～25%为1分,阳性细胞占26%-50%为2分,阳性细胞51%～75%为3分,阳性细胞>75%为4分。两种评分相乘(A×B),将结果分为：0分为阴性(-)；1～4分为弱阳性(+)；5-8分为中度阳性(++)；9-12分为强阳性(+++)。蛋白免疫印迹与结果判定：绘制蛋白标准曲线,提取总蛋白并测定蛋白浓度。将所有样品稀释至目标浓度-20℃保存。制备SDS-PAG凝胶,加样后120V电泳。恒定电压100V下转膜2h,室温封闭1小时。将CIP2A一抗用TBST稀释至1：280,将膜置于孵育袋中4℃下孵育过夜。用TBST配置按1：10000配置二抗,室温下孵育2h,进行ECL发光。结果判定：对成像结果进行扫描,蛋白含量以积分光密度值表示。每次检测时都检测β-actin。并使用QUANTITY ONE 4.6采集数据。用CIP2A与β-actin的比值作为CIP2A相对表达水平,并进行统计学分析。结果CIP2A蛋白在慢性萎缩性胃炎(36／45,80%)、肠上皮化生(46／50,92%)、异型增生(17／28,60.7%)及胃癌(121／159,76.1%)组织中的阳性表达率显著高于正常胃黏膜(33／97,34.0%)P<0.05；CIP2A在异型增生及胃癌中的阳性表达无显著统计学差异,P>0.05；CIP2A蛋白的阳性表达率从高分化管状腺癌(8／9,88.9%)、中分化管状腺癌(51／59,86.4%)到低分化腺癌(42／66,63.6)呈逐级递减关系,rk=0.317,P<0.001。胃癌Lauren分型中CIP2A在肠型胃癌(61／70,87.1%)的表达显著高于弥漫型胃癌(46／73,63%),P=0.001；CIP2A表达与患者的年龄、性别、Borrmann分型及淋巴结转移无显著关联,P>0.05。在蛋白免疫印迹分析中,CIP2A在胃癌中的表达水平明显高于正常胃黏膜(88.49±2.88vs79.63±2.52,t=2.314P=0.025)。c-Myc在肠上皮化生(46／50,92%)及胃癌(130／159,81.8%)组织中的阳性表达率显著高于正常胃黏膜(62／97,63.9%)P<0.05；c-Myc蛋白的阳性表达强度从高分化管状腺癌(8／9,88.9%)、中分化管状腺癌(51／59,86.4%)到低分化腺癌(51／66,77.3%)呈逐级递减,rk=-0.254,P=0.003。胃癌Lauren分型中c-Myc在肠型胃癌(60／70,86.5%)的表达高于弥漫型胃癌(55／73,73.9%),但差异无统计学意义,P>0.05。c-Myc表达与胃癌患者的年龄、性别、Borrmann分型及淋巴结转移无显著关联,P>0.05。Ki-67在肠上皮化生(41／50,82%)及胃癌(105／159,66%)中的阳性表达率显著高于正常胃黏膜(47／97,48.5%)P<0.05；胃癌Lauren分型中Ki-67在肠型胃癌(51／70,72.9%)中的表达高于弥漫型胃癌(43／73,58.9%),但差异无统计学意义,P>0.05。Ki-67蛋白阳性与年龄、性别、Borrmann分型淋巴结转移无统计学差异。159例胃癌组织中CIP2A蛋白与Ki-67蛋白的表达呈显著正相关,rk=0.420,P<0.001；在159例胃癌组织中CIP2A蛋白与c-Myc表达呈正相关性,rk=0.442,P<0.001。结论CIP2A在慢性萎缩性胃炎、肠化生、异型增生及胃癌组织中的阳性表达显著高于正常胃黏膜,提示CIP2A可能作为致癌因子参与了胃癌的发生；在高分化、中分化、低分化管状腺癌CIP2A阳性表达呈逐级递减并且具有等级相关性,提示CIP2A与胃癌细胞的分化相关；CIP2A在肠化生及肠型胃癌的高表达提示CIP2A与肠型胃癌的发生密切相关。c-Myc及Ki-67在肠上皮化生及胃癌中的阳性表达率显著高于正常胃黏膜,c-Myc及Ki-67在肠型胃癌的表达高于弥漫型胃癌,但差异无统计学意义。c-Myc及Ki-67作为细胞增殖活跃指标,反应胃癌细胞的增殖活性。CIP2A与Ki-67在159例胃癌组织中的表达呈正相关,提示CIP2A可能在促进胃癌细胞增殖及恶性转化方面起重要作用。CIP2A与c-Myc在胃癌组织中呈正相关性,为减少胃癌组织中c-Myc蛋白的表达提供了新的途径,使CIP2A可能成为胃癌治疗新的靶点,但其机制仍需进一步研究。