基于上呼吸道黏膜免疫探讨解表方治疗表证的作用及机制

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目的:急性上呼吸道感染(上感)是常见的呼吸道传染病,上呼吸道黏膜免疫功能低下是上感反复发作的重要原因之一,目前的临床治疗措施尚难从根本上解决上感反复发作的问题。根据上感的临床症状特点,中医将其归为“表证”的范畴,辨证采用辛温解表法、辛凉解表法和扶正解表法进行干预取得较好的治疗效果,然而几种治法指导下应用的解表方的作用及机制尚不清楚。本论文的研究,从调节上呼吸道黏膜免疫功能的角度入手,模拟人类急性上呼吸道感染疾病的基本特征,通过建立寒冷致小鼠上呼吸道黏膜免疫功能低下模型,并采用鼻腔及腹腔接种乙型溶血性链球菌方法,结合体外抑菌实验,观察几种解表方的治疗作用特点,以期揭示中医解表法治疗上感的科学内涵。方法:1.解表方对小鼠上呼吸道黏膜免疫功能低下模型的影响将昆明种小鼠置于-20。C寒冷环境中,以小鼠的生存状况、唾液中sIgA含量及溶菌酶活性作为评价指标,观察不同时间点动物的反应情况,确定造模所需最适的寒冷时间,建立寒冷致小鼠上呼吸道黏膜免疫功能低下模型;给予解表方,采用ELISA法检测唾液中sIgA的含量,采用比浊法测定溶菌酶活性,评价解表方对该模型的影响。2.解表方对上呼吸道黏膜免疫功能低下合并鼻腔接种乙型溶血性链球菌小鼠的死亡保护作用建立小鼠上呼吸道黏膜免疫功能低下模型,给予模型小鼠鼻腔接种乙型溶血性链球菌,观察解表方对模型小鼠的死亡保护作用。3.解表方对上呼吸道黏膜免疫功能低下模型小鼠鼻腔接种乙型溶血性链球菌的影响确定最适细菌浓度及最适收集小鼠唾液样本时间,以溶菌酶为评价指标,确定最佳实验条件,给予解表方,采用ELISA法检测唾液中sIgA的含量,比浊法测定溶菌酶活性,评价解表方对黏膜免疫的影响。4.解表方对上呼吸道黏膜免疫功能低下模型小鼠腹腔注射乙型溶血性链球菌的影响建立小鼠上呼吸道黏膜免疫功能低下模型,给予模型小鼠腹腔注射乙型溶血性链球菌,观察动物死亡情况,进一步明确解表方的作用是否为通过增强上呼吸道黏膜免疫功能而实现其治疗作用。5.解表方的体外抑菌实验采用琼脂平皿打孔法,了解四个解表方对乙型溶血性链球菌是否具有体外抑菌作用。结果:1.将小鼠置于-20℃寒冷环境中15min,能使小鼠唾液中sIgA含量和溶菌酶活性明显低于正常组小鼠,可建立稳定的小鼠上呼吸道黏膜免疫功能低下模型。麻黄汤可以提高上呼吸道黏膜免疫功能低下模型小鼠唾液中sIgA含量和溶菌酶活性;桂枝汤和玉屏风散仅能够提高模型小鼠唾液中溶菌酶活性。2.麻黄汤和银翘散对上呼吸道黏膜免疫低下合并鼻腔接种乙型溶血性链球菌的小鼠有生存保护作用。3.小鼠置于-20℃寒冷环境中15min,鼻腔接种200μl浓度为5×107CFU/ml的乙型溶血性链球菌,4小时后小鼠唾液中溶菌酶活性明显低于正常组;辛温解表方麻黄汤能提高模型小鼠唾液中sIgA含量。4.几种解表方对上呼吸道黏膜免疫功能低下小鼠腹腔注射乙型溶血性链球菌的死亡率没有保护作用。5.几种解表方对乙型溶血性链球菌无体外抑菌作用。结论:1.本研究成功建立小鼠上呼吸道黏膜免疫功能低下模型。2.辛温解表方可通过提高上呼吸道黏膜免疫功能防治上呼吸道感染。
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