研究背景：　　结直肠癌(CRC)是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一，目前我国结直肠癌患者发现多属晚期，五年生存率低，而结直肠进展期腺瘤（CRA）是结直肠癌最重要的癌前病变。大量数据显示，TNM I期结直肠癌可通过外科手术治愈，II期率的五年生存率为78％，III期和IV期的五年生存率不足40%，探索TNM I、II期CRC和CRA的最佳筛查方法具有较高的临床意义。最近研究发现，粪便脱落细胞miR-135b在结直肠癌、结直肠腺瘤的表达量高于正常对照，差异具有统计学意义，但诊断意义较低，可能与当前采用的粪便脱落细胞富集方法导致的细胞富集率低有关。我们首次采用了hNOK/hSef单克隆抗体-叶酸磁珠法，富集清肠液中的肠道上皮脱落细胞，并评估该方法的富集效率。同时以TNM I、II期CRC、进展期腺瘤和正常对照为研究对象，评估粪便脱落细胞miR-135b诊断结直肠进展期腺瘤和TNM I、II期癌的诊断意义及其与临床病理特点的相关性。　　目的：　　1.验证miR-135b在结直肠癌癌组织与癌旁正常粘膜组织的表达量差异，及其与TNM分期的关系。　　2.评估hNOK/hSef单克隆抗体-叶酸纳米磁珠法富集粪便脱落细胞的效率。　　3.评估粪便脱落细胞miR-135b诊断TNM I、II期CRC和CRA的诊断意义及其与临床病理特点的相关性。　　方法：　　1.抽取北京军区总医院消化内窥镜室2014年9月至2015年12月期间行结肠镜检查并经病理学确诊的CRC患者18例，不伴有其他恶性肿瘤，未进行手术、放化疗等任何治疗。在行结肠镜检查时留取癌组织及癌旁正常黏膜组织，离体后立刻放入盛有RNALater RNA stablization reagent的冻存管中，置于﹣80℃冰箱中保存。提取结直肠癌癌组织、癌旁正常组织的总RNA，电泳检测提取到的总RNA完整性，实时定量PCR（real-time PCR，qRT-PCR）测定其中miR-135b的相对表达量。验证miR-135b在结直肠癌患者癌组织表达量与癌旁正常粘膜组织的差异，及其与TNM分期的关系。　　2.抽取北京军区总医院消化内窥镜室2014年9月至2015年12月期间行结肠镜检查的患者102例，其中TNM I、II期结直肠癌患者52例；进展期腺瘤患者34例（腺瘤直径大于1cm）；正常人16例作为对照。以上病例均经病理学诊断证实，不伴有其他恶性肿瘤，患者未进行手术、放化疗等任何治疗。收集患者口服导泻药后的清肠液送至实验室,采用hNOK/hSef单克隆抗体-叶酸磁珠法富集粪便脱落细胞，制得细胞悬液，分为2份。一份用于细胞计数和提取DNA后通过qRT-PCR检测细胞内参基因（β-actin）信号，评价富集细胞的效率；另一份用于提取RNA，qRT-PCR测定其中miR-135b的相对表达量。评估粪便脱落细胞miR-135b表达量对TNM I、II期CRC、CRA和正常对照的诊断意义及其与临床病理特点的相关性。　　结果：　　1.所有样本提取的总RNA OD值在1.8-2.0之间，说明样本未受污染，电泳图可见28s、18s、5s三条带，说明RNA具有较高的完整性。　　2. miR-135b在CRC患者癌组织中的表达高于癌旁正常组织（P=0.021），且与TNM分期进展呈正相关。　　3.粪便脱落细胞悬液反应前平均细胞计数为1.0×106/ml，反应后平均细胞计数为0.97×106/ml，所有样本内参基因（β-actin）信号均为阳性。　　4.粪便脱落细胞miR-135b在进展期腺瘤的表达水平高于正常对照（P=0.029）；在TNM I、II期结直肠癌粪便脱落细胞中的表达水平高于正常对照（P=0.038）；TNM I、II期的表达水平无明显区别（P=0.290）。根据ROC曲线结果分析，截断点（cut off值）=1.63时，粪便脱落细胞miR-135b在进展期腺瘤、TNM I、II期结直肠癌的敏感性分别为76.92%、78.24%，在正常对照的特异性为87.50%， AUC分别为0.70（P=0.02）、0.80（P<0.001）。　　5.早期结直肠癌患者粪便脱落细胞中miR-135b的表达与患者年龄、性别、肿瘤分化水平、TNM分期和所在部位无关。　　结论：　　1. miR-135b在CRC患者癌组织中的表达量高于癌旁组织，且与TNM分期进展呈正相关。　　2. hNOK/hSef单克隆抗体-叶酸纳米磁珠法富集粪便中脱落肠道上皮细胞具有较高的效率。　　3.粪便脱落细胞miR-135b具有较好的TNM I、II期结直肠癌和进展期腺瘤诊断价值，其表达水平与年龄、性别、肿瘤部位、分化程度无关，TNM I和II期的表达量无明显差异。　　本课题为国家自然科学基金“国家高技术研究发展计划（863计划）（编号：2014AA020803）”。