【摘 要】
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本论文对生物毒素玉米赤霉烯酮的免疫分析方法进行了深入系统的研究,合成出玉米赤霉烯酮的半抗原,研究了半抗原与载体蛋白结合的方法,制备了高效价和高特异性的玉米赤霉烯酮
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本论文对生物毒素玉米赤霉烯酮的免疫分析方法进行了深入系统的研究,合成出玉米赤霉烯酮的半抗原,研究了半抗原与载体蛋白结合的方法,制备了高效价和高特异性的玉米赤霉烯酮抗体。通过对免疫分析形式与免疫分析的特异性、灵敏性的关系以及谷物基质中干扰物对酶联免疫分析方法的影响,建立了一种简便、快捷、实用的玉米赤霉烯酮免疫分析方法——直接竞争酶联免疫检测方法。此法灵敏度较高,IC50为0.06μg/kg,IC15为0.01μg/kg。在对实际样品进行检测的研究中,由于玉米赤霉烯酮广泛存在于各种谷物中,选取大麦、小麦、玉米、燕麦作为研究对象考查了它们的基质影响及其去除方法。四种样品经过甲醇提取后,大麦、小麦、燕麦样品的甲醇提取液用掩蔽剂稀释后可消除基质影响,玉米样品的甲醇提取液直接用PBS稀释后可消除基质影响。在方法的准确性实验中,在30,60,120μg/kg三个加标水平上,直接竞争酶联免疫检测方法的回收率在70~100%。通过高效液相色谱检测方法,对建立的玉米赤霉烯酮直接竞争酶联免疫检测方法的准确性进行了验证。两种方法检测结果具有较高的相关性,线性相关系数R2值为0.9828。根据本研究,进一步开发并制成检测玉米赤霉烯酮的试剂盒。所研制的玉米赤霉烯酮96孔板式快速检测试剂盒检测结果稳定、准确,抗干扰能力强,可用于大量样品的快速现场检测。
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