益气温阳活血化痰方通过抑制内质网应激对HHPH大鼠脑的保护作用

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目的:  1.观察低氧高二氧化碳性肺动脉高压下大鼠的脑损伤改变及内质网应激相关蛋白及其mRNA表达水平的变化;  2.研究内质网应激在低氧高二氧化碳性肺动脉高压大鼠脑损伤中的作用;  3.研究益气温阳活血化痰方对低氧高二氧化碳性肺动脉高压大鼠脑损伤的干预作用及机制。  方法:  1.选取健康雄性清洁级SD大鼠50只,采用随机数字表法分为5组,每组10只,包括对照组(C)、低氧高二氧化碳组(MO)、益气温阳活血化痰方低剂量组(L)、中剂量组(M)、高剂量组(H)。对照组置于常氧环境中饲养,每天8小时,每周6天,饲养4周。MO组、L组、M组、H组均置于低氧高二氧化碳氧仓中(舱内吸入氧浓度8.5-11%、二氧化碳浓度5-6%)饲养,舱内水蒸汽用无水CaCl2吸收,每天8小时,每周6天,饲养4周。低氧高二氧化碳组大鼠给予等体积生理盐水灌胃,益气温阳活血化痰方低、中、高剂量组大鼠每天分别按0.15g/kg、0.3g/kg、0.6g/kg灌服益气温阳活血化痰方药浸膏。  2.在体低氧高二氧化碳性肺动脉高压模型复制成功指标检测:采用右心导管法测量各组造模大鼠的肺动脉平均压。  3.饲养4周后对各组造模大鼠进行手术,且对大鼠进行心脏灌流,灌流结束后开颅并快速取出脑组织检测脑含水量,光镜下观察脑组织形态学变化,用TUNEL法检测脑细胞凋亡指数,分光光度计法检测脑组织中Caspase-3酶活性, Western blotting检测脑组织p-JNK、GRP78、Caspase-12和CHOP蛋白表达水平, RT-PCR检测脑组织JNK、GRP78、Caspase-12和CHOP mRNA表达水平。  结果:  1.与对照组相比,低氧高二氧化碳组(MO组)、益气温阳活血化痰方低剂量组(L组)、中剂量组(M组)、高剂量组(H组)的大鼠脑含水量、细胞凋亡指数、Caspase-3酶活性、p-JNK、Caspase-12、CHOP、GRP78蛋白及mRNA均有升高,组织形态学结构亦有损伤性变化;  2.与低氧高二氧化碳组比较,益气温阳活血化痰方低、中、高剂量组的脑含水量、细胞凋亡指数、Caspase-3酶活性、p-JNK、Caspase-12、CHOP和GRP78蛋白及mRNA均有降低,脑组织结构损伤性的变化亦有明显减轻,并以中剂量组(0.3g/kg)损伤减轻最为显著。  结论:  1.低氧高二氧化碳性肺动脉高压大鼠通过激活过度的内质网应激引起自身脑组织损伤。  2.益气温阳活血化痰方能通过抑制内质网过度应激减轻低氧高二氧化碳性肺动脉高压大鼠的脑组织损伤,并以中剂量(0.3g/kg)效果最佳。
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