Pseudomonas sp.PB-3胞外多糖制备、提取及应用研究

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微生物胞外多糖可以永久性的作为可再生资源,较植物多糖以及天然合成高分子而言,不但具有它们许多共同的优良性质,而且基本无毒性,而在不同的区域或气候条件下产量和质量均较为稳定。其应用广泛且具有较高价值。研究中发现,医药工业中,它在抗肿瘤、抗辐射、抗感染、抗病毒及抗变性反应等方面有着显著的作用,而在降低血糖以及免疫激励领域也潜在着较高的价值;而在食品工业中,它可以作为凝胶剂、保湿剂、增稠剂和稳定剂等发挥着重要的作用;此外,环境优化及污水处理中,其作为微生物絮凝剂有着极大的发挥空间。本文从取自滨化集团公司的活性污泥中,筛得一株高产胞外多糖菌株PB-3。通过生理生化鉴定及16S rDNA序列分析,鉴定PB-3为假单胞菌(Pseudomonas sp.)。优化了Pseudomonas sp.PB-3多糖发酵的多项参数,通过单因素实验分析,Pseudomonas sp.PB-3菌发酵产多糖过程中,蔗糖为最佳碳源,硝酸钠为最佳碳源。其后又通过响应面法对Pseudomonas sp.PB-3菌发酵产多糖的发酵培养基以及发酵条件进行了优化,得最佳培养基的配比为蔗糖43.42g/L, NaNO32.07g/L, K2HPO45.14g/L, KCl0.1g/L, MgSO4·7H2O0.2g/L,在培养基的基础上,菌株PB-3培养80h,得到的Pseudomonas sp.PB-3菌胞外多糖的最大量为13.70g/L,比培养基优化前提高了18.30%。得到的培养的最佳条件为温度30.89℃,接种量10.44%,种龄19.47h,装液量50mL,摇床转速200rpm,初始发酵pH7.0,发酵时间80h,在培养条件优化的基础上Pseudomonas sp.PB-3菌胞外多糖最大量为15.57g/L,且比发酵条件优化前提高10.43%。通过冰乙醇分级沉淀得到Pseudomonas sp.PB-3菌多糖粗品HC-7,对粗品进行sevag法脱蛋白、CM-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephacryl S-500凝胶过滤层析后,得到较纯的多糖组分HC-L,通过测定其理化性质及组分,得到其主要成分为多糖,经测定得到HC-L总糖及葡糖糖醛酸的含量分别为92.79%和40.37%。Pseudomonas sp.PB-3菌所产多糖HC-L为白色粉末,能够溶于冷水,HC-L溶于水后,溶液粘稠且透明,HC-L分子量为192KDa。通过紫外光谱测定,在260nm和280nIn附近HC-L均无吸收峰,可以得到HC-L中不含蛋白质和核酸。由HC-L红外光谱图得到:-OH的振动伸缩出现在3425cm-1处,这种特征糖类共有,原因是氢键存在于糖类的分子内或分子间,在3600cm-1-3200cm-1处出现-OH伸缩振动的一种宽峰。C-H的伸缩振动出现在2920cm-1处。而羧基中C=O的伸缩振动出现在1724cm-1和1616cm-I处,多种羟基中的C-O伸缩振动出现在1053cm-1处。本文还对HC-7的絮凝作用进行研究,并对影响絮凝的多种因素进行了详细的优化分析,通过对碳氮源的研究,得到蔗糖,有机氮源对于絮凝有着较好的作用,通过对培养基初始pH、通气量、作用pH、絮凝剂加量、离子种类和温度的研究,得到HC-7絮凝活性高、耐热性强、耐碱性、不容易自解等优点。还分别测定了其对印染污水和黄河水的絮凝作用,都取得了较好的效果,絮凝率分别为93.72%和94.67%。
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