【摘 要】
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目的: 用dispase和羧基荧光素乙酰乙酸(5,6-carboxyfluorescein djacetate succinimidy ester,CFDA-SF)标记的同种异体视网膜色素上皮(retina pigment epithelium,RPE)细胞联
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目的: 用dispase和羧基荧光素乙酰乙酸(5,6-carboxyfluorescein djacetate succinimidy ester,CFDA-SF)标记的同种异体视网膜色素上皮(retina pigment epithelium,RPE)细胞联合作用,诱导C57BL/6J小鼠增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的产生,并评价该模型的有效性。
方法: 取10-15同龄C57BL/6J小鼠的RPE细胞进行体外培养,传至2-3代制成细胞悬液,用CFDA-SE染色标记后备用。将32只健康的成年C57BL/6J小鼠,随机平均分成4组。分别向右眼玻璃体腔内注射5μL dispase+RPE(A组)、dispase(B组)、RPE(C组)、PBS(D组)。A、B两组dispase的浓度为2.4U/mL。A、C两组RPE细胞的浓度为2×107/5μL。于注射后3天,1周,2周,4周,6周时,利用裂隙灯显微镜检查眼前节情况,用直接检眼镜检查眼底、记录PVR的分级,并在手术显微镜和VOLK+90D前置镜下行眼底照相。最后于第6周结束时摘取眼球进行组织病理学分析。
结果: 注射后第3天-6周,dispase+RPE(A组)、djspase(B组)、RPE(C组)均不同程度地发生了玻璃体内积血,可见玻璃体内弥散色素颗粒、小细胞团,玻璃体内条索及膜结构形成,视网膜皱褶,髓线脱离,视网膜脱离等PVR典型征象。A组较B、C两组病变发生时相早、程度深而广泛。PBS组(D组)未见明显的PVR征象发生。注射后第6周结束时,A、B、C三组视网膜脱离率分别为87.5%、62.5%和75%。
结论: 将dispase和CFDA-SE标记的同种异体传代RPE细胞注射入玻璃体腔内,可以诱发C57BL/6J小鼠PVR的产生。该模型的建立方法快速,有效,成功率高,病变发生过程接近临床,可广泛应用于对PVR病理过程,药物筛选,基因治疗等方面的研究。
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