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目的本研究目的是筛选出一株能合成蛋氨酸,并向环境中分泌蛋氨酸的瘤胃微生物,通过体外发酵模拟试验评价其合成蛋氨酸的效能,对其培养条件进行优化,为开发反刍动物微生物添加剂奠定基础。方法分别以来自于伊春的天然牧草放牧的中国荷斯坦奶牛瘤胃内容物和自然放牧饲养的内蒙古草原黄牛的瘤胃液为样品,用蛋氨酸缺陷培养基分离纯化,检测菌株的蛋氨酸合成量,保留含量变化较大的菌株,通过16SrRNA测序和生化反应鉴定为其定名。采用单因素试验设计和L9（33）正交试验对菌株培养基中碳源、氮源及无机盐成分进行优化,通过L9（34）正交试验设计对其发酵时间、发酵温度、进样量和装液量等发酵条件进行改进,并建立活菌数与OD600nm值之间的直线回归方程。通过体外模拟瘤胃发酵试验测试该菌株在瘤胃发酵过程中对瘤胃pH值、总蛋白含量、消化率等指标的影响。检测数据采用SPSS17.0统计软件进行LSD及Duncan比较进行分析。结果1、用蛋氨酸缺陷培养基从牛的瘤胃内容物中筛选获得一株微生物,通过革兰氏染色镜检结果、菌落的形态、16SrRNA测序结果以及菌株生化反应结果,确定其为热带假丝酵母菌,定名为Candida tropical TYM001。2、建立了该株热带假丝酵母菌的标准生长曲线:y=12.15x-2.7124,R2=0.9495,能通过测得的菌液OD600nm值测定培养液中的活菌的数量。3、通过单因素试验和L9（33）正交试验得到了较为合理的培养基。该菌株最适碳源为葡萄糖,添加量为20.0g/L;最适氮源为无氨基酸酵母,添加量为10.0g/L;最适无机盐和添加量分别为NaCl 5.0g/L、MgSO4 7.0g/L、KH2PO4 5.0g/L。4、通过L9（34）正交试验得到了较为适合的发酵条件。发酵温度35℃、装液量3.5L、发酵时间36h、接种量180mL和发酵温度37℃、装液量2.5L、发酵时间34h、接种量180mL这两组试验水平下发酵液中游离氨基酸的含量均达到最大值27.815mg/L。各因素间主次关系为:发酵时间>接种量>发酵温度>装液量。5、体外模拟瘤胃发酵试验发现添加热带假丝酵母菌的试验组发酵液pH值在经历短暂的下降之后,于6-18h开始上升,并在24h时超过了起始pH值。游离蛋氨酸的含量及总蛋白的含量变化趋势也是先升高后降低再升高,并均优于对照组。结论1、以牛瘤胃内容物为样品分离得到一株热带假丝酵母菌,属隐球酵母目、隐球酵母科,定名Candida tropical TYM001。其初始蛋氨酸合成量为4.386mg/L,与对照组的1.262mg/L相比有大幅度提高。2、经培养条件优化后菌株的游离蛋氨酸合成量为27.815mg/L,比优化前相比提高了23.429mg/L,比对照组相比提高了26.553mg/L。优化后培养基条件为葡萄糖20.0g/L、无氨基酸酵母10.0g/L、NaCl5.0g/L、MgSO47.0g/L和KH2PO5.0g/L。培养条件为发酵温度35℃、装液量3.5L、发酵时间36h、接种量180mL或发酵温度37℃、装液量2.5L、发酵时间34h、接种量180mL。3、该株热带假丝酵母菌能够提高瘤胃pH值,并可提高日粮的消化率,提高发酵液的总蛋白水平。