淫羊藿苷联合四环素对糖皮质激素诱导的大鼠骨髓间充质干细胞损害的保护作用

来源 :辽宁医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hufei1984
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目的体外构建糖皮质激素诱导大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stemcells, BMSCs)损害的实验模型,观察糖皮质激素对大鼠BMSCs的损害情况;探讨淫羊藿苷(Icariin, ICA)联合四环素对糖皮质激素所致大鼠BMSCs损害的保护作用。方法大鼠BMSCs分离与体外培养,构建糖皮质激素损害细胞模型。实验分组:正常对照组、激素对照组(地塞米松浓度10-8mol/L)、淫羊藿苷组(淫羊藿苷浓度为20ng/ml的含激素培养基)、四环素组(四环素浓度为100μg/ml的含激素培养基)、淫羊藿苷联合四环素组(淫羊藿苷浓度为20ng/ml+四环素浓度为100μg/ml的含激素培养基)。用MTT法观察各组不同时间点的OD值,测定细胞生存率并绘制细胞生长曲线。吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色检测各组细胞凋亡情况。免疫组织化学法分析细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达。蛋白免疫印迹(Western blotting)分析细胞凋亡蛋白Caspase-3表达。结果MTT结果示:联合应用组与其它组相比较,联合应用组保护作用比其它组更强,组间差异具有统计学意义(p﹤0.05)。吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色结果示:联合应用组与其它组相比较细胞凋亡率下降,组间差异具有统计学意义(p<0.05)。免疫组化结果示:联合应用组与其它组相比较抑制凋亡的蛋白Bcl-2表达增加、促进凋亡的蛋白Bax表达降低,组间差异具有统计学意义(p﹤0.05)。蛋白免疫印迹结果示:联合应用组凋亡蛋白Caspase-3表达与其它组相比较表达降低,组间差异有统计学意义(p﹤0.05)。结论糖皮质激素可以抑制大鼠BMSCs体外的增殖,此种抑制呈现浓度和时间依赖性。ICA联合四环素能够降低激素抑制BMSCs增殖的作用,并能抑制激素诱导细胞凋亡的作用。ICA联合四环素具有保护激素损害BMSCs的作用,这为早期干预治疗激素性骨坏死提供了实验药理依据。
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