【摘 要】
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研究目的:通过体内外脑缺血再灌注模型,研究LncRNA MIAT对脑缺血再灌注损伤的影响并初步阐明其作用的机制。研究方法:（1）用氧-葡萄糖剥夺再灌注（oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）处理对SH-SY5Y细胞构建脑缺血再灌注的体外模型,并用CCK-8法检测OGD/R处理对SH-SY5Y细胞活性、RT-qPCR检测LncRNA MIAT的表达
【基金项目】
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项目名称:内皮细胞膜微粒通过LncRNA MIAT调控神经元Beclin-1和Caspase-3加重脑缺血再灌注损伤的机制,项目合同编号:81860222,项目来源:国家自然科学基金,项目起止时间:2019.01-2022.12； 项目名称:外泌体LncRNA MIAT通过miR-106b-5p调控神经元ATG6加重脑缺血再灌注损伤的机制，项目合同编号:2019G
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研究目的:通过体内外脑缺血再灌注模型,研究LncRNA MIAT对脑缺血再灌注损伤的影响并初步阐明其作用的机制。研究方法:（1）用氧-葡萄糖剥夺再灌注（oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）处理对SH-SY5Y细胞构建脑缺血再灌注的体外模型,并用CCK-8法检测OGD/R处理对SH-SY5Y细胞活性、RT-qPCR检测LncRNA MIAT的表达的影响;（2）利用RNA原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization,FISH）观察LncRNA MIAT在SH-SY5Y细胞中的分布;（3）用si-MIAT转染SH-SY5Y细胞,使LncRNA MIAT下调,并用RT-qPCR验证下调的效果;（4）分别使用RT-qPCR、Western Blotting、透射电镜分别从mRNA、蛋白和形态学角度观察下调LncRNA MIAT后SH-SY5Y细胞自噬的变化情况;（5）用C57BL/6J小鼠MCAO/R模型模拟体内脑缺血再灌注的变化情况;（6）用腺相关病毒（adeno-associated virus,AAV）沉默小鼠体内的LncRNA MIAT,并用RT-qPCR验证沉默效果;（7）使用Longa评分法对LncRNA MIAT沉默前后MCAO/R小鼠模型神经功能的缺损程度进行评估;（8）通过TTC染色观察比较LncRNA MIAT沉默前后对MCAO/R引起的脑梗死面积大小的影响;（9）通过HE染色观察LncRNA MIAT沉默前后对MCAO/R引起的脑组织形态学变化的影响;（10）通过RT-qPCR和Western Blotting分别在mRNA、蛋白水平验证体内LncRNA MIAT沉默前后MCAO/R小鼠模型中p62、LC3和Beclin-1的改变情况。研究结果:LncRNA MIAT在SH-SY5Y细胞质和细胞核中均有表达。OGD/R处理使SH-SY5Y细胞活性降低,且LncRNA MIAT表达明显升高,同时p62表达降低、LC3表达升高,提示其自噬水平上调。体外用si-MIAT转染沉默LncRNA MIAT的效率约为50%。沉默LncRNA MIAT后,可以减缓OGD/R导致的SH-SY5Y自噬水平增加趋势。在动物体内,MCAO/R使小鼠的LC3、Beclin-1水平升高,p62下降,脑组织损伤严重,神经功能缺损评分升高,而用AAV沉默LncRNA MIAT可使MCAO/R后脑梗死面积减小、神经功能缺损评分降低。与对照组相比,沉默LncRNA MIAT减缓了MCAO/R造成的LC3和Beclin-1表达升高、p62表达降低的趋势。结论:（1）LncRNA MIAT在SH-SY5Y细胞的细胞核、细胞质中均有表达。在SH-SY5Y细胞中,OGD/R处理使其细胞活性降低;同时,伴随自噬水平上升和LncRNA MIAT表达增加。在SH-SY5Y细胞中下调LncRNA MIAT,可以减轻由OGD/R导致的自噬水平增加的趋势。（2）在动物体内,MCAO/R造成脑组织受损和神经功能缺损、自噬水平上升;而下调LncRNA MIAT后,可减轻MCAO/R导致的脑组织损伤和自噬水平增加的趋势。
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