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治疗用基因工程抗体有巨大的社会和经济效益。然而其用量大，这使基因工程抗体的高效表达成为其临床应用的最重要的先决条件之一。目前上市的和处于临床研究的基因工程抗体绝大部分是在CHO细胞中表达的。表达载体系统是获得高表达抗体细胞株的关键。因此，研究表达载体的构建及各个元件对高效表达的影响有理论和现实意义。首先用载体pSwD3-hc和pDNHG-hc在CHO细胞中进行了抗人肝细胞肝癌全抗体的表达研究，发现该抗体表达水平较低。随后以载体pDNHG-hc和pIRESdhfr为基础，通过对二氢叶酸还原酶基因dhfr的不同弱化方式，构建了双顺反子表达载体pIRESdhfr-hc和pDl1-4。根据各载体在相同条件下转染CHOdhfr-的克隆形成率的比较，得出各载体中dhfr基因的弱化程度由强到弱的顺序为pDI4，pDI3,pDI2,pIRESdhfr-hc,pDIl。我们认为载体pDI2和pIRESdhfr-c中dhfr基因的弱化程度适合于外源基因高表达。我们选用载体pDI2在CHOdhfr-细胞中对抗人肝细胞肝癌全抗体的表达进行了研究。挑选了86个单克隆，其中14个为阳性克隆。其中一个表达较好的克隆在无H(次黄嘌呤)和T(胸腺嘧啶脱氧核苷)的筛选条件下，表达水平为6． 15ng／105cell·3day。但是在传代培养过程中，各个克隆抗体表达水平均下降，最后检测不到表达。在相同条件下我们比较了抗人肝细胞肝癌全抗体和其他全抗体的瞬时表达，证实了抗人肝细胞肝癌全抗体是较难表达的抗体。为了进一步验证构建的dhfr基因弱化的一系列载体能否有效实现全抗体的高表达，我们将新构建的一系列载体中的抗人肝细胞肝癌抗体基因替换为抗人膀胱癌全抗体基因，并选择了其中三种载体(即pIRESdhfr-B、pIRESdhfr-BA和pDI-B2) 进行了系统的表达研究。结果表明，此三种载体都能够有效实现抗人膀胱癌全抗体在CHOdhfr-细胞中的稳定表达，且在无H和T的筛选条件下，阳性率都为100％。挑选表达水平较新的克隆，逐步提高MTX浓度进行三轮加压扩增(MTX浓度依 中文摘要次为l火10一从，Zxlo一物，5只10一物)，可以明显提高抗人膀眺癌全抗体在CHOdhfr-细胞的表达水平，较无H和T的筛选条件下表达水平提高了大约50倍，达到川.6、，g八口cell·3day。这些研究结果说明本研究构建的多种全抗体表达载体(尤其是pDI一BZ和PIREsdhfr一B)能够应用于全抗体的高效表达研究。