成纤维细胞生长因子 5(Fibroblast Growth Factor-5 FGF5)在小鼠和大鼠体内有重要的生物学功能,尤其是皮肤毛囊的周期性生长的重要调控因子。本研究用山羊脑组织 RNA 采用 RT-PCR 方法克隆测序了山羊 FGF5 基因的 cDNA 编码序列;用 RT-PCR 的方法检测了 FGF5 基因 mRNA 在绒山羊皮肤毛囊周期性生长不同时期的表达分布;利用 PCR-SSCP 方法检测了 FGF5 基因单核苷酸多态性,并对小尾寒羊、湖羊、藏羊、中国美利奴羊等绵羊品种以及内蒙古绒山羊、辽宁绒山羊、文登奶山羊等不同山羊品种单核苷酸多态性进行了群体遗传分析。结果如下: (1)本研究利用 RT-PCR 方法克隆了羊 FGF5 基因的 cDNA 序列,得到了 925bp的序列,并对该序列进行了分析,与成纤维细胞生长因子家族的成员一样也是由三个外显子组成,也具有一信号序列,成熟蛋白为 270 个氨基酸,经同源性比对得出大鼠与小鼠的 FGF5 氨基酸同源性最高为 97%,在与羊的蛋白质比较中大鼠与羊的同源性为 83%,小鼠与羊的同源性为 84%,人与羊的同源性最高,为 89%。从蛋白比较中可知蛋白的变化主要发生在第一外显子和第三外显子所对应的区域。 (2)从 RT-PCR 实验结果得出 Fgf5 基因 mRNA 在绒山羊毛囊生长旺期和退行期均有表达,与文献报道的 Fgf5 基因在皮肤组织中的表达相似,但文献报道用RT-PCR 方法检测时出现了长短两条带,即在鼠的皮肤组织中有剪切方式不同的两种 mRNA 存在,短片断经测序是缺失了外显子 2 的结果。在实验中我们设计的引物是包括外显子 2 的序列,却只得到了一种剪切形式的表达,经测序是长片断,而缺失外显子 2 的短片断形式没有检测到,这是 Fgf5 基因在鼠和山羊的皮肤组织中不同的地方。 (3)在检验的 4 对 FGF5 基因的引物中,我们发现 2 对引物的扩增片段具有多态性。在山羊群体中引物 1 扩增片段多态性是由 1 个核苷酸的改变(A→G)而产生的;引物 2 扩增片段的多态性由 C→T 突变所致, 两个突变位点均没有引起氨基酸的改变,属同义突变;在绵羊群体中,引物 1 扩增片段多态性是由 1 个核苷酸的改变(G→T)而产生的;引物 2 扩增片段的多态性由 C→T 突变所致; 引物 1 的突变位点是错义突变,引起了编码氨基酸(A→S)的改变;引物 2 扩增片段多态性属于无义突变,没有引起编码氨基酸的改变。 (4) 对不同绵羊品种的基因型和基因频率统计结果表明,引物 1 中小尾寒羊、湖羊、藏羊以等位基因 A 为主,而中国美利奴羊则以等位基因 B 为主,且不同品种