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第一部分姜黄素抑制骨肉瘤细胞MG-63和HOS增殖目的:研究姜黄素是否能够影响骨肉瘤细胞增殖。方法:用不同浓度的姜黄素(0.1%DMSO,2.5μM,5μM,10μM)处理骨肉瘤细胞(MG-63和HOS),CCK-8实验、克隆形成实验和流式细胞术用于检测细胞增殖情况。Western blot实验检测凋亡蛋白BAX和BCL-2的表达。结果:CCK-8结果显示姜黄素处理组(5μM,10μM)在48h和72h的吸光度均低于对照组(0.1%DMSO)。与对照组(0.1%DMSO)相比,姜黄素处理组(10μM)的克隆形成数明显减少,流式细胞术提示,姜黄素处理细胞后细胞凋亡率增加。Western blot实验结果表明,姜黄素使细胞中BAX蛋白表达水平上调,BCL-2蛋白表达水平下调。结论:综上所述,实验结果提示姜黄素抑制骨肉瘤细胞MG-63和HOS的增殖。第二部分姜黄素影响骨肉瘤细胞中mi R-21,RECK和wnt/β-cantenin通路蛋白的表达水平目的:研究姜黄素作用于骨肉瘤细胞MG-63和HOS,是否能够影响细胞中mi R-21和它的靶基因RECK,以及wnt/β-cantenin信号通路相关蛋白的表达,探讨姜黄素抗肿瘤作用的机制。方法:用不同浓度(0.1%DMSO,2.5μM,5μM,10μM)的姜黄素处理骨肉瘤细胞48h,RT-q PCR检测细胞中mi R-21和RECK的表达水平,Western blot实验检测wnt通路蛋白β-catenin,GSK-3β和c-myc的表达。结果:与对照组(0.1%DMSO)相比,细胞中mi R-21和wnt/β-catenin通路蛋白β-catenin,GSK-3β和c-myc的表达水平随姜黄素浓度升高逐渐降低,RECK表达则逐渐升高。结论:姜黄素能够下调骨肉瘤细胞中mi R-21,上调它的靶基因RECK,并且抑制wnt/β-cantenin信号通路蛋白的表达,表明姜黄素可能通过影响mi R-21/RECK和wnt/β-cantenin信号通路发挥抗肿瘤作用。第三部分转染hsa-mi R-21-5p-mimics过表达mi R-21能逆转姜黄素对骨肉瘤细胞的作用目的:探讨通过转染hsa-mi R-21-5p-mimics上调mi R-21是否可以逆转姜黄素对骨肉瘤细胞的抑制作用,以及上调mi R-21是否会影响RECK和wnt/β-cantenin信号通路蛋白的表达水平。方法:骨肉瘤细胞转染hsa-mi R-21-5p-mimics,RT-qPCR验证转染效率。CCK-8,Western blot验证上调mi R-21后姜黄素对骨肉瘤细胞增殖的影响,Western blot检测细胞转染后RECK和wnt/β-cantenin信号通路蛋白的表达情况。结果:RT-q PCR结果显示骨肉瘤细胞转染组的mi R-21表达明显高于阴性对照组,表明细胞成功转染hsa-mi R-21-5p-mimics。与对照组(姜黄素组)相比,实验组(mimics+姜黄素组)CCK-8实验的吸光度值升高,BAX蛋白表达下降,BCL-2表达升高,且wnt通路蛋白β-catenin,GSK-3β和c-myc的表达升高,RECK表达降低。结论:上调mi R-21能够逆转姜黄素对骨肉瘤细胞的抑制作用,影响RECK和wnt通路蛋白的表达,表明姜黄素可能通过mi R-21影响其靶基因RECK和wnt/β-cantenin通路发挥其抑制细胞增殖作用。