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新疆一枝蒿(Artemisia rupestris L.)又名岩蒿,属菊科蒿属多年生草本植物。药用全草,具有祛风活血、散瘀消肿、健胃消食、清热解毒、抗过敏、解蛇毒等功能,用于治疗毒蛇咬伤、荨麻疹、消化不良、感冒、肝炎、过敏性疾病等症,为常用维吾尔药材之一。为了提高新疆一枝蒿药材的产量和品质,我们利用组织培养技术进行了新疆一枝蒿多倍体育种的研究,旨在选育出有效成分含量高的优良品种。现将实验结果总结如下:
1.新疆一枝蒿离体快速繁殖体系的建立。结果显示:新疆一枝蒿无菌苗茎段在MS+6-BA1.0 mg·L-1+NAA0.05 mg·L-1培养基上诱导出的丛生芽长势健壮,芽增殖系数可达11。在不加激素的MS培养基上再生芽生根率可达100%。
2.新疆一枝蒿的多倍体诱导与鉴定。采用茎段浸泡法和培养基培养法对新疆一枝蒿进行了化学诱导,形态学观察结果显示:茎段浸泡法的诱导效果比培养基培养法好,其中以0.2%秋水仙素浸泡茎段24 h的处理效果最好,变异率达27.3%。染色体鉴计数和流式细胞仪检测结果均表明我们获得了四倍体和异倍性嵌合体。采取切割不定芽并诱导不定芽丛生的方法对异倍性嵌合体进行分离,流式细胞仪检测结果显示分离得到了四倍体植株,表明采取该方法来分离异倍性嵌合体是可行的。四倍体继代植株的倍性鉴定结果表明诱变获得的四倍体植株倍性具有较好的稳定性。
3.新疆一枝蒿试管苗的移栽。结果显示:草炭土比蛭石和珍珠岩的混合基质更适合作为新疆一枝蒿的试管苗移栽基质。移栽后的7 d内存活率可达100%,但7 d到14 d之间,由于实验环境中温度、湿度无法控制稳定,部分试管苗叶片会枯萎,逐渐茎部也会枯萎以至死亡,存活率仅为38%。
4.四倍体植株和二倍体植株的形态学的初步观察。结果显示:四倍体植株和二倍体植株相比,四倍体植株茎干粗壮,节间长度缩短,根粗壮,叶片厚且颜色深绿。四倍体植株和二倍体植株气孔大小分别为:34.7±0.2×29.6±0.2μm和22.8±0.2×19.4±0.2μm(长×宽),气孔显著增大:四倍体植株和二倍体植株的气孔密度分别为:84.3±4.8 mm-2和120.5±5.7 mm-2,气孔密度显著下降。
5.四倍体植株和二倍体植株的HPLC指纹图谱和一枝蒿酮酸含量的分析。对瓶内生长9个月的新疆一枝蒿植株及其亲本二倍体进行了HPLC指纹图谱比对,并对二者中所含一枝蒿酮酸的含量进行了测定。HPLC指纹图谱比对结果显示:四倍体植株和二倍体植株均存在原药材指纹图谱的中的4个特征峰,如蒙花苷、一枝蒿酮酸、金腰素乙和洋艾素。一枝蒿酮酸的含量测定结果显示:四倍体植株的一枝蒿酮酸含量明显高于二倍体的,增加约55.8%。