【摘 要】
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嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）是养殖鱼类重要的病原菌之一,可诱导草鱼氧化应激和肠道炎症,而关于对鱼类肝脏脂质代谢的研究鲜有报道。研究表明枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）可改善养殖水体水质、提高宿主免疫水平和抗氧化功能等,但其对鱼类肝脏脂质代谢的影响尚不明确。本实验利用投喂高脂日粮的草鱼（Ctenopharyngodon idella）和健康草鱼肝细胞,研
【基金项目】
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国家自然科学基金（NO.31472310,31672683）； 湖北省技术创新工程（2018ABA103）；
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嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）是养殖鱼类重要的病原菌之一,可诱导草鱼氧化应激和肠道炎症,而关于对鱼类肝脏脂质代谢的研究鲜有报道。研究表明枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）可改善养殖水体水质、提高宿主免疫水平和抗氧化功能等,但其对鱼类肝脏脂质代谢的影响尚不明确。本实验利用投喂高脂日粮的草鱼（Ctenopharyngodon idella）和健康草鱼肝细胞,研究枯草芽孢杆菌和嗜水气单胞菌对草鱼肝脏脂质代谢的影响及其分子机制,主要研究内容与结果如下:1.高脂日粮对草鱼肝脏脂质代谢与氧化应激的影响为研究高脂日粮对草鱼肝脏脂质代谢与氧化应激的影响,选取健康草鱼120尾（平均体重50.82±3.13g）,分为对照组（Con组）和高脂饲料组（HF组）,实验周期8周。结果表明:1)高脂日粮促进草鱼特定生长率（SGR）和摄食量（FI）（P＜0.05）;2)高脂日粮影响草鱼肝脏内脂质沉积及脂质代谢相关基因表达:HF组肝脏脂肪含量显著升高（P＜0.05）,脂质代谢相关基因m RNA表达水平显著下调（P＜0.05）;3)高脂日粮可诱导肝脏内氧化应激和脂质过氧化,造成草鱼肝脏损伤:HF组血清胆固醇（CHO）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、谷草转氨酶（AST）活性、肝脏过氧化氢（H2O2）和丙二醛（MDA）含量均显著升高（P＜0.05）。2.枯草芽孢杆菌及嗜水气单胞菌对高脂日粮草鱼肝脏脂质代谢与氧化应激的影响实验鱼暂养4周:一部分实验鱼投喂基础饲料,一部分投喂基础-益生菌饲料（益生菌饲料活菌含量为1×10~7CFU/g）。选取健康草鱼240尾（平均体重50.73±3.17g）分为4组:HF组,A.hydrophila组（腹腔注射1.0×10~5CFU/fish）,A.hydrophila+B.subtilis组和B.subtilis+A.hydrophila组,实验周期8周。结果表明:1)A.hydrophila加重高脂日粮草鱼肝脏内脂质积累:A.hydrophila组肝脏脂肪含量、脂质合成相关基因m RNA表达水平显著升高（P＜0.05）;2)A.hydrophila可诱导草鱼肝脏脂质过氧化和损伤:血清AST活性、肝脏H2O2和MDA含量均显著升高（P＜0.05）;3)B.subtilis降低感染A.hydrophila诱导的高脂日粮草鱼肝脏内脂质沉积:A.hydrophila+B.subtilis组和B.subtilis+A.hydrophila组肝脏脂肪含量、脂质合成相关基因m RNA表达水平显著低于A.hydrophila组（P＜0.05）,脂质分解相关基因m RNA表达水平显著上调（P＜0.05）;4)B.subtilis可缓解感染A.hydrophila诱导的高脂日粮草鱼肝脏损伤:血清AST活性、肝脏H2O2和MDA含量下调。3.枯草芽孢杆菌及嗜水气单胞菌对草鱼肝细胞脂质代谢与氧化应激的影响本实验旨在研究嗜水气单胞菌、枯草芽孢杆菌及共孵育对草鱼肝细胞脂质代谢与氧化应激的影响。分离获得草鱼肝细胞（每孔3m L 1.25×10~6cell/m L）,培养细胞形成单层膜状后分成4组:Con组,B.subtilis组及A.hydrophila组（各100μL3×10~8CFU/m L）,B.subtilis+A.hydrophila组（各50μL 3×10~8CFU/m L）,分别孵育6h和12h。结果表明:1)A.hydrophila可诱导肝细胞脂肪变性及脂质代谢异常:A.hydrophila组细胞存活率显著降低（P＜0.05）,细胞裂解液TG含量、脂质代谢相关基因m RNA表达水平显著上调（P＜0.05）;2)A.hydrophila可造成肝细胞氧化损伤:A.hydrophila组培养液上清LDH活性、H2O2和MDA含量均显著升高（P＜0.05）;3)B.subtilis可显著降低A.hydrophila诱导的草鱼肝细胞脂质沉积:B.subtilis+A.hydrophila组细胞存活率显著高于A.hydrophila组（P＜0.05）,细胞裂解液TG含量、脂质代谢相关基因m RNA表达水平显著降低（P＜0.05）;4)B.subtilis可缓解A.hydrophila引起的肝细胞氧化损伤:B.subtilis+A.hydrophila组培养液上清LDH活性、H2O2和MDA含量显著降低（P＜0.05）。
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