论文部分内容阅读
目的:牙髓感染常伴发持续剧烈疼痛。尽管中枢神经系统的神经可塑性改变、外周神经系统的传入神经敏化被认为参与牙髓感染导致的疼痛,然而,迄今为止,我们对牙髓感染导致的疼痛机制还不完全了解。Chemokine(C-X3-C motif)Ligand 1(CX3CL1)是趋化因子 CX3C-chemokine 亚家族的唯一成员,而 chemokine(C-X3-C motif)receptor 1(CX3CR1)被认为是CX3CL1的唯一专有受体。研究证明,CX3CL1与CX3CR1相互结合反应后,可以通过介导细胞的趋化、粘附等功能招募白细胞游走、迁移至炎性组织。同时,研究显示,神经系统中CX3CL1及CX3CR1在炎性疼痛的发生、发展过程也有重要作用。CX3CL1与CX3CR1反应,可以通过调节炎性介质释放致敏伤害感受器,进而介导神经元-神经胶质细胞之间的信号转导作用。因而CX3CL1-CX3CR1可能是免疫系统与神经系统之间发挥双向作用的关键因子。本研究应用完全弗氏佐剂(Complete Freund’sAdjuvant,CFA)诱导建立大鼠磨牙牙髓感染动物模型,应用免疫组化、免疫荧光标记法,检测大鼠牙髓感染过程中CX3CL1与CX3CR1在牙髓、根尖周组织、三叉神经系统的动态表达,探讨神经免疫系统通过CX3CL1-CX3CR1途径参与牙髓感染过程中的信号调节作用及可能机制。材料和方法:选取成年雄性Sprague-Dawley大鼠,右下颌第一磨牙牙合面行开髓术后,髓腔内封入CFA构建大鼠牙髓感染动物模型,正常对照组大鼠不做任何处理。多聚甲醛磷酸盐缓冲液心脏灌流固定动物后,取双侧三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)及双侧下颌骨组织脱钙后,制作连续组织冰冻切片。应用免疫组化与免疫荧光染色检测大鼠TG、牙髓、根尖周组织CX3CL1与CX3CR1的动态表达。结果:1.组织病理学检测可见,大鼠右下颌第一磨牙髓腔封入CFA24小时后,冠髓以开髓点为中心形成坏死区,成牙本质细胞排列紊乱并发生空泡性变,根尖周组织局部炎性渗出。随炎症进展,牙根周围牙槽骨骨髓腔内出现大量弥散性炎细胞浸润灶,炎性浸润向周围牙槽骨扩散蔓延,形成局限性牙槽突骨髓炎及根尖周炎,炎细胞以粒细胞、多核巨细胞、淋巴细胞为主。至CFA致炎6周后,冠髓和根髓组织坏死脱落,根尖周组织炎性渗出区可见成纤维组织增生,炎症反应局限。提示大鼠牙髓感染动物模型建立成功。2.CX3CL1免疫组化染色结果显示,CFA致炎后,右下颌第一磨牙冠髓、根髓组织以及根尖周组织炎性渗出区均可见CX3CL1阳性信号表达,而正常对照组罕见。CX3CL1阳性信号主要表达在炎细胞胞浆内。统计学分析显示,根尖周炎性渗出区CX3CL1阳性细胞数在CFA致炎24小时后开始升高,1周后达到峰值,随后下降,6周后恢复至正常水平。3.CX3CR1免疫组化染色结果显示,CFA致炎后,根尖周组织炎性渗出区炎细胞胞浆内可见CX3CR1阳性表达,正常对照组罕见。统计学分析显示,CFA致炎24小时后,根尖周组织炎性渗出区CX3CR1阳性细胞数开始升高,1周后达到峰值,至6周时,持续高于正常水平。4.免疫荧光染色结果显示,CX3CL1主要表达于TG卫星胶质细胞,细胞影像成典型的环状结构围绕在神经元周围。统计学分析显示,CFA致炎后72小时,CX3CL1阳性细胞率显著增高,2周后达到峰值,6周后恢复至正常水平。CX3CR1主要表达在TG神经元细胞体,呈均质样分布于神经元细胞质内。统计学分析显示,CFA致炎后24小时以及72小时,CX3CR1阳性细胞率明显高于对照组。结论1.大鼠牙髓感染过程中,CX3CL1-CX3CR1参与外周局部炎症反应。2.三叉神经系统通过调节神经细胞CX3CL1-CX3CR1反应参与牙髓感染过程。3.CX3CL1与CX3CR1介导牙髓感染过程中三叉神经节卫星胶质细胞与神经元之间的信号转导作用。