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目的:将携带有survivin显性负性突变体(Cys84-Ala Survivin)基因片段和表达miR-24的质粒转染至人肺乳头状腺癌细胞株NCI-H441中,分别观察它们对细胞株形态和功能的影响并探讨相关作用机制,为肺癌的靶向治疗提供一种新方法。方法:第一部分:以人肺乳头状腺癌细胞株NCI-H441为实验对象,设定实验组(Cys84-AlaSurvivin)、空载体组(pCDNA3)和空白对照组。台盼蓝活细胞拒染实验监测细胞的生长变化情况;Alamar Blue实验监测细胞增殖活性的变化;Annexin-V和TUNEL实验检测转染细胞凋亡情况;caspase-8/-9活性实验、Magic Red实验检测酶活性的改变;免疫荧光法检测凋亡诱导因子AIF的表达情况。第二部分:以人肺乳头状腺癌细胞株NCI-H441为实验对象,设定实验组(转染质粒 pCDNA6.2-GW/EmGFP-miR/hsa-miR-24)、空载体组(转染质粒pCDNA6.2-GW/EmGFP-miR)和空白对照组。台盼蓝活细胞拒染实验监测细胞的生长变化情况;Alamar Blue实验监测细胞增殖活性的变化;Western Blotting蛋白印迹实验检测survivin蛋白的表达情况,caspase-8/-9活性实验、Magic Red实验检测酶活性的改变。结果:第一部分:1.台盼蓝活细胞拒染实验结果显示:转染后48、72、96小时实验组活细胞数明显低于空载体组和空白对照(P<0.001);实验组转染后24小时开始细胞生长受到抑制,转染后72小时细胞生长速度达到最低,之后细胞生长速度稍有上升,但活细胞总数仍低于空载体组和空白对照组。2.Alamar Blue实验结果显示:转染后48、72、96小时实验组细胞增殖活性显著低于空载体组和空白对照组(P<0.001)。3.AnnexinV实验结果显示转染后24、48和72小时实验组凋亡指数均显著高于空载体组和空白对照组(P<0.001);TUNEL实验结果显示转染后48和72小时实验组的凋亡指数显著高于空载体组和空白对照组(P<0.001)。4.转染后48小时和72小时实验组肿瘤细胞caspase-9活性显著高于空载体组和空白对照组(P<0.001);Magic Red实验显示转染后48小时和72小时实验组caspase-3/-7活性明显增强。5.转染后各时间点实验组、空载体组和空白对照组凋亡诱导因子AIF的阳性表达位置为细胞浆,未见明显AIF表达位点的细胞核转位。第二部分:1.台盼蓝活细胞拒染实验结果显示实验组转染后72、96、120小时实验组活细胞数显著低于空载体组和空白对照组(P<0.00l);实验组转染后24小时开始细胞生长受到抑制,直至转染后120小时。2.Alamar Blue实验结果显示转染后72、96、120小时实验组细胞增殖活性明显低于空载体组和空白对照组(P<0.01)。3.Western Blotting蛋白印迹实验显示实验组转染后48小时survivin蛋白的表达稍有下降,到转染后72、96小时survivin蛋白表达水平进一步降低。4.转染后72小时和96小时实验组肿瘤细胞caspase-8活性高于空载体组和空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),Magic Red实验显示转染后72小时和96小时实验组caspase-3/-7活性明显增强。结论:1.Cys84-Ala Survivin能够显著抑制人肺乳头状腺癌细胞株NCI-H441的生长,降低其增殖活性;2.Cys84-Ala Survivin能促进NCI-H441的凋亡,主要是通过caspase-9依赖的内源性凋亡通路进行调节并涉及caspase-3和caspase-7,而与caspase-8的作用无明显相关性;3.Cys84-Ala Survivin对凋亡的促进作用不涉及AIF的功能;4.miR-24能抑制NCI-H441的生长,降低其增殖活性;5.miR-24能下调survivin蛋白的表达,survivin可能是其直接或间接的靶基因;6.miR-24 的表达使 caspase-8、caspase-3 和 caspase-7 的活性增强、对 caspase-9的活性无明显影响,提示其对肺癌细胞的抑制作用涉及外源性凋亡通路而与内源性凋亡通路可能无关。