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目的:基于肠道菌群变化,研究乌梅丸对2型糖尿病(Type 2 diabetes,T2DM)模型鼠干预的作用机制,探究乌梅丸是否通过TLRs/NF-κB信号通路,对T2DM大鼠产生影响。方法:选取80只雄性SD大鼠作为研究对象,正常饲养一周后,根据随机分配原则抽取10只作为正常组。剩余70只作为造模组给予高脂高糖乳剂灌胃8周后,腹腔注射35mg/kg链脲佐菌素(STZ)诱导形成T2DM的模型。将空腹血糖值≥11.1mmol/L视为模型建立成功。剔除造模失败的大鼠,剩余造模成功的大鼠再随机分为模型组、二甲双胍组、乌梅丸高剂量组、乌梅丸中剂量组和乌梅丸低剂量组,各组10只。正常组和模型组中的大鼠给予生理盐水按20ml/kg灌胃,二甲双胍组给予二甲双胍按200mg/kg灌胃,乌梅丸高、中、低剂量组给予乌梅丸汤剂分别按20g/kg、10g/kg、5g/kg灌胃,并于实验期间定期监测大鼠空腹血糖值和体重。经用药四周后,处理大鼠,取血清及粪便、肠内容物、胰腺组织、结肠组织待检。采用16S-r DNA对大鼠粪便进行测序,观察各组大鼠肠道微生物多样性的变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1(IL-1)、白介素6(IL-6)、白介素22(IL-22)的水平;气相色谱检测大鼠肠内容物短链脂肪酸(Short-chain fatty acids.SCFAs)的含量;蛋白免疫印迹法(Western bloting)检测大鼠结肠组织NF-κB p65、P-NF-κB p65、IκBα、P-IκBα、My D88的表达水平;免疫组化法检测大鼠胰腺组织NF-κB p65、TLR4的表达;HE染色观察大鼠胰腺组织形态学的变化。结果:1.大鼠一般情况与体重的观察:正常组大鼠状态良好,饮食、饮水正常,毛色整齐洁白,体重始终呈稳定上升的趋势。模型组与用药组大鼠高脂高糖乳剂灌胃后毛色逐渐出现发黄的现象,体重增长十分显著并且高于正常组(P﹤0.05);造模后,大鼠垫料更换频率增加,气味加重,饮食量增加,体重呈明显下降趋势(P﹤0.05)。用药组用药四周后,各用药组大鼠体重下降趋势变缓,且饮食、尿量均有所改善。2.大鼠血糖的监测:正常组大鼠血糖始终保持在正常范围内。模型组与用药组造模前,大鼠血糖亦属于正常范围;造模后,大鼠血糖明显升高,且显著高于正常组(P﹤0.01);用药组用药四周后,各组血糖均有所下降(P﹤0.01或P﹤0.05)。3.肠道菌群多样性检测:3.1.物种分析:与正常组比较,模型组物种丰富度较低,分布不均匀,厚壁菌门(Firmicutes)、梭菌纲(Clostridia)、放线菌纲(Actin0bacteria)、乳酸菌属(Lactobacillus)、拟杆菌属(Bacteroides)丰度降低,拟杆菌门(Bacteroidetes)、普雷沃菌属(Prevotella)、埃希菌属(Escherichia)丰度增加;与模型组比较,二甲双胍组与乌梅丸低剂量组物种丰富度较高,分布比较均匀,二甲双胍组与乌梅丸高、中、低剂量组中Firmicutes、Bacteroides丰度增加,Prevotella丰度减少。Clostridia、Lactobacillus在二甲双胍组与乌梅丸中、低剂量组中丰度升高,Escherichia丰度降低;Actin0bacteria则在二甲双胍组与乌梅丸高、低剂量组中丰度增加,乌梅丸中剂量组中丰度降低。3.2.Alpha多样性分析:与正常组比较,模型组sobs、chao、ace指数均减少,差异有显著性(P﹤0.01);与模型组比较,二甲双胍组、乌梅丸中剂量组、乌梅丸低剂量组sobs、chao、ace指数增加,差异有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05),乌梅丸高剂量组sobs、chao、ace指数降低(P﹤0.05);shannon指数在各组间并无显著性差异。4.ELISA检测大鼠血清TNF-α、IL-1、IL-6、IL-22含量:与正常组比较,模型组TNF-α、IL-1、IL-6、IL-22的含量均明显增加(P﹤0.01);与模型组比较,二甲双胍组、乌梅丸高、中、低剂量组中,TNF-α、IL-1、IL-6、IL-22含量均有所降低,差异具有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05)。5.气相色谱检测大鼠肠内容物SCFAs含量:与正常组比较,模型组大鼠乙酸、丙酸、正丁酸的含量明显下降,差异有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05);与模型组比较,二甲双胍组和乌梅丸高、中、低剂量组大鼠乙酸、丙酸、正丁酸含量均有所升高,差异具有统计性(P﹤0.01或P﹤0.05)。6.Western bloting检测结肠组织NF-κB p65、P-NF-κB p65、IκBα、P-IκBα、My D88蛋白表达水平:与正常组比较,模型组结肠组织NF-κB p65、P-NF-κB p65、P-IκBα、My D88的蛋白表达量均升高,IκBα蛋白表达量降低(P﹤0.01);与模型组比较,二甲双胍组与乌梅丸高、中、低剂量组结肠组NF-κB p65、P-NF-κB p65、P-IκBα、My D88的蛋白表达量均有所降低,IκBα蛋白表达量增加,差异有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05)。7.免疫组化检测大鼠胰腺组织NF-κB p65、TLR4的表达:与正常组比较,模型组大鼠胰腺组织NF-κB p65、TLR4阳性表达均明显增加(P﹤0.01);与模型组比较,二甲双胍组、乌梅丸高剂量组、乌梅丸中剂量组、乌梅丸低剂量组大鼠胰腺组织NF-κB p65、TLR4阳性表达均有不同程度的减少,差异具有统计性(P﹤0.01)。8.HE染色观察大鼠胰腺形态:正常组大鼠胰岛成团块状,胰岛细胞完整,排列整齐,细胞核清晰可见,边界明显。模型组大鼠胰岛形状不规则,细胞间出现间隙,部分细胞呈空泡样改变,边界模糊不清。而二甲双胍组及乌梅丸高、中、低剂量组胰腺组织病理变化改善显著。结论:乌梅丸对肠道菌群的丰度与多样性有调节作用,能够降低T2DM大鼠血糖,减缓体重下降趋势,增加短链脂肪酸的含量,减少炎性因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-22的释放,改善炎症反应;并且可以降低结肠组织NF-κB p65、P-NF-κB p65、P-IκBα、My D88蛋白的表达,增加IκBα蛋白的表达;此外,乌梅丸还可以减少T2DM胰腺组织NF-κB p65、TLR4的表达,改善胰腺组织病理变化。综上所述,乌梅丸可能通过调节肠道菌群,干预T2DM模型鼠TLRs/NF-κB信号通路,从而达到对T2DM的治疗作用。