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研究背景与目的弱氧化型低密度脂蛋白(minimally modified low density lipoprotein,mm LDL)是指仅脂质部分被氧化,载脂蛋白B100结构中赖氨酸残基未被破坏的LDL,可以被LDL受体识别,可以被进一步氧化成ox LDL。有研究发现在离体器官和细胞培养中,mm LDL可以显著上调心脑血管平滑肌内皮素B受体,增强血管的收缩功能;mm LDL还能与巨噬细胞上的TLR4结合,启动免疫反应诱发大量炎症因子的产生,还诱导细胞吞噬功能改变,加速泡沫细胞的形成。前期研究发现,mm LDL显著降低血管内皮依赖性舒张功能,主要通过上调TLR4的蛋白表达量,诱发炎症反应,损伤内皮细胞超微结构。本实验将观察mm LDL对肠系膜动脉α1受体的作用及机制。方法本实验设立三组模型进行,分为尾静脉注射生理盐水组(NS),尾静脉注射mm LD组(mm LDL),尾静脉注射mm LDL同时腹腔注射U0126组(mm LDL+U0126)。U0126为ERK1/2通道特异性抑制剂,在尾静脉注射mm LDL前2h腹腔注射。药物注射时间为96 h,注射完成后将小鼠脱臼处死,取小鼠肠系膜动脉,使用微血管肌张力描记仪测量去甲肾上腺素(Noradrenaline,NA)在小鼠肠系膜动脉引起的血管张力,Elisa试剂盒检测小鼠体内ox LDL,TNF-α和IL-1β血清浓度,实时定量PCR、Western Blotting分别检测α1受体、α2受体、TNF-α、IL-1β和p ERK1/2的表达。结果U0126显著抑制mm LDL增强α受体介导的收缩功能,使Emax值由mm LDL组的(161±11)%降低为(130±11)%(P<0.01),p EC50由mm LDL组的6.20±0.07降低为5.75±0.14(P<0.05)。使用选择性α1受体拮抗剂哌唑嗪(10-11~10-9 M)使NA量效曲线平行右移不伴有Emax值的显著改变,p A2值为10.91±0.28。选择性α2受体拮抗剂育亨宾(10-7~10-5 M)使NA量效曲线平行右移不伴有Emax值的显著改变,p A2值为7.28±0.24。mm LDL引起α1受体表达增加,腹腔注射U0126明显抑制了mm LDL的这个作用。腹腔注射U0126后,α1受体m RNA水平由mm LDL组的8.21±0.56降低为1.24±0.07(P<0.001);α1受体蛋白水平由mm LDL组的1.31±0.03降低为0.93±0.05(P<0.01),mm LDL对α2受体表达基本无显著影响,使用U0126后,α2受体表达也几乎没有发生变化。腹腔注射U0126,α2受体m RNA水平由mm LDL组的0.89±0.02略升高为0.99±0.05(P>0.05);α2受体蛋白水平由mm LDL组的0.78±0.02略升高为0.81±0.02(P>0.05);mm LDL同时还增加了肠系膜动脉ERK1/2蛋白磷酸化水平,p ERK1/2与ERK1/2蛋白条带灰度比值由对照组的0.50±0.01升高为0.83±0.01(P<0.01);腹腔注射U0126能明显抑制ERK1/2的磷酸化,灰度比值由mm LDL组的0.83±0.01降低为0.49±0.01(P<0.01);与对照组相比,mm LDL能明显升高血清中IL-1β(30.0±3.0 pg/m L升高为67.2±4.5 pg/m L P<0.01)和TNF-α(117.4±2.7 pg/m L升高为264.8±4.6 pg/m L P<0.01)浓度;U0126能明显抑制IL-1β和TNF-α的表达,IL-1β由mm LDL组的67.2±4.5 pg/m L降低为42.9±1.8 pg/m L(P<0.01),TNF-α由mm LDL组264.8±4.6 pg/m L降低为175.4±2.8 pg/m L(P<0.01);同时肠系膜动脉IL-1β的m RNA水平由对照组1.01±0.04升高为3.27±0.01(P<0.01),腹腔注射U0126后,使IL-1β的m RNA水平由mm LDL组的3.27±0.01降低为1.35±0.02(P<0.01),TNF-α的m RNA水平由对照组0.99±0.01升高为6.80±0.21(P<0.001),TNF-α的蛋白表达由对照组0.39±0.01升高为0.59±0.01(P<0.01);腹腔注射U0126后使TNF-α的m RNA水平由mm LDL组6.80±0.21降低为1.60±0.07,蛋白表达由mm LDL组0.59±0.01降低为0.40±0.01;血清IL-1β、TNF-α水平与去甲肾上腺素(NA)引起的最大作用(Emax)呈现正相关。结论mm LDL激活ERK1/2信号转导通路引起TNF-α和IL-1β水平增高,增高血管平滑肌α1受体的表达,并且引起α1受体介导血管收缩增强。