黄河裸裂尻鱼冷适应主要相关蛋白和酶的分子进化特征及其生态学意义

来源 :青海大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:wxdong2009
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季节性寒冷是青藏高原重要的限制性生态因子之一,高原土著动物在长期的适应进化过程中形成了独特的冷适应策略。黄河裸裂尻鱼是裂腹鱼亚科鱼类的代表种,广泛分布于青藏高原东北部海拔在2000~4500m的黄河上游干支流、附属湖泊及柴达木水系,对高原季节性寒冷环境表现出极强的适应性,在青藏高原淡水生态系统的食物链中具有重要的地位。本研究采用RT-PCT、5’-RACE和3’-RACE法获得黄河裸裂尻鱼ob、CS基因全长cDNA序列及CO I、CO II、CO III基因的编码序列,并对相关序列特征进行了分析;采用半定量RT-PCR技术检测了黄河裸裂尻鱼组织中ob、CS、CO I、CO II、CO III基因的组织表达特异性;利用Real-Time PCR检测了不同环境温度下黄河裸裂尻鱼肝胰脏和白肌中ob、CS、CO I、CO II、CO III基因的表达水平,以期为探究黄河裸裂尻鱼在高原季节性寒冷环境下的生态适应机制积累科学数据。主要研究结果如下:(1)黄河裸裂尻鱼leptin蛋白cDNA基因序列全长为1337bp,其中包括5′-端非翻译区(5′-UTR)长110bp,3′-端非翻译区(3′-UTR)714bp,开放阅读框(ORF)长516bp,编码一个由170个氨基酸组成的蛋白质,在其N末端含有一个20个氨基酸组成的信号肽序列;ob基因mRNA在黄河裸裂尻鱼在心脏中表达最强,在肾脏、肌肉、脑、脂肪、肠、鳃、精巢中表达量次之,在肝胰脏中微量表达;无论是肝胰脏还是白肌,随着环境水温的升高,两组织ob基因表达量显著提高,随着栖息水域环境温度下降,将显著抑制肝胰脏和白肌ob mRNA的表达。(2)黄河裸裂尻鱼CS基因cDNA序列全长为3186bp,其中包括5′-UTR长142bp,3′-UTR1637bp, ORF长1407bp,编码468个氨基酸。编码蛋白N末端具有一个由28个氨基酸组成的线粒体转移肽,C末端具有柠檬酸合成信号,符合该模体的序列片段是:346GYGHAVLRKTDPR358。CS基因mRNA在所有检测组织中均有表达,其中胃、精巢、卵巢中的表达量最高,肾、红肌、肠、白肌、肝胰脏和脂肪中的表达量较低,心脏中最低;随着栖息水温上升,CS基因mRNA在肝胰脏和白肌中的表达水平具有下降趋势。(3)黄河裸裂尻鱼CO I基因全长为1551bp,ORF由基因全长组成,编码516个氨基酸;CO II基因全长为691bp,ORF为690bp,编码230个氨基酸;CO III基因全长为786bp,其ORF也是由基因全长组成,编码261个氨基酸。CO I亚基基因在精巢中微弱,在其余组织中均有表达,其中白肌、卵巢和心脏表达相对较弱;CO II在精巢和脂肪微弱表达,其余组织表达量较高并且相对恒定;CO III亚基基因在检测的组织中均有表达,除精巢中表达较弱外,其余组织表达量都较高且相对恒定;随着栖息环境水温上升,CO I、CO II、CO III基因在肝胰脏和白肌中的表达水平显著上升。
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