目的：为发展多特异性避孕疫苗，用基因工程技术构建重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβ-CTP，在巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达重组抗原pZP3α-hCGβ-CTP。方法：根据pZP3α全长和hCGβCTP编码的DNA序列设计两对引物，通过部分重叠聚合酶链式反应(overlapping PCR)，扩增出pZP3α-hCGβ-CTPDNA片断，克隆到载体质粒pPIC9K中，然后导入大肠杆菌DH5α，用PCR和双酶切反应鉴定重组质粒，并用DNA测序仪对重组质粒测序，构建好的重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβ-CTP，用电打孔方法转入巴氏毕赤酵母，用缺组氨酸的MD平板筛选阳性株，并在含G418的YPD培养基中筛选多拷贝插入菌株，用甲醇诱导表达，鉴定表达产物。结果：3步PCR扩增出pZP3α-hCGβ-CTPDNA片段，插入到载体质粒pPIC9K的克隆位点，获得重组pPIC9K-pZP3α-hCGβ-CTP表达质粒，测序结果显示插入序列与设计预期完全一致。转化嗜甲醇酵母获得耐受4mg／mL G418的菌株，经SDS-PAGE电泳和Western blotting检测表明其上清培养液中的蛋白可与猴抗pZP3α抗体和兔抗hCG抗体发生特异性的反应。结论：重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβ-CTP构建成功，并在巴氏毕赤酵母中获得重组抗原pZP3α-hCGβ-CTP的表达，为探讨重组多特异性避孕疫苗抗生育效能的研究建立基础。