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抗体介导的移植物排异反应是导致移植物失功的主要原因，也是影响移植肾长期存活的关键性因素。目前广泛认为，器官移植后移植物发生抗体介导排异反应及移植物失功主要与受者DSA的产生密切相关，而NDSA及非HLA抗体对移植物存活的影响尚未得到足够重视。有文献报道，器官移植受者血清中未产生DSA的情况下，仍然存在针对移植物的抗体介导的排异反应[4,5]。另有研究报道，器官移植患者体内诸如血管紧张素受体、抗波形蛋白抗体、抗过氧化脂类抗体等诸多自身抗体与移植物的排异反应密切相关并影响移植物长期存活[7-10]。综上所述，除了供体特异性抗体之外，非供体特异性HLA抗体及非HLA抗体也是影响移植物存活的重要因素。器官移植致敏后产生的抗体主要为特异性抗供者HLA的抗体，然而在研究中发现，肾移植受者血清中亦可检测出NDSA的出现[6,11-13]，在无特异性免疫致敏的前提下，NDSA产生的原因尚不完全明确。目前普遍接受的解释为交叉反应原理[14-17]，即由于部分HLA之间存在共用的抗原决定簇，故肾移植术后患者血清中产生特异性抗供者HLA抗体的同时，也可以与供者表达的HLA相似的抗原发生反应，从而表现为NDSA的出现。然而有研究发现，肾移植患者在没有产生DSA的情况下也可检测出NDSA，肾移植术后NDSA出现的平均中位时间甚至早于DSA[14]。此种现象显然不能用现有的交叉反应理论来解释。自然抗体（Natural antibodies）是一类未经免疫致敏而广泛存在于人类血清中的抗体[18]。自然抗体由于能够与抗原决定簇毫不相关的多种抗原均发生反应，故表现出多反应性的特点，从而在人类先天免疫中发挥着重要的作用。自然抗体的重要特性是能够与凋亡细胞结合[19-22]。长期以来，对多反应性抗体的研究主要集中于人类自身免疫性疾病领域，而针对多反应性抗体在器官移植领域的研究却罕有报道。鉴于多反应性抗体的特性，在本研究中，我们分别从单克隆B细胞、抗体水平以及肾移植患者血清学水平探寻多反应性抗体与HLA抗体产生的相关性。同时研究肾移植受者血清内预存的多反应性抗体与抗体介导移植肾排异反应的相关性及对移植肾长期存活的影响。结果如下：1、多反应性抗体与HLA抗体产生的相关性。本研究中，我们将B淋巴细胞从肾移植受者外周血及手术切除的移植肾中分选出来并在体外永生化，成功培育出单克隆B淋巴细胞克隆。通过检测发现所有B淋巴细胞克隆均分泌抗体，部分单克隆抗体可以与多种抗原诸如LPS、dsDNA、胰岛素、细胞裂解产物等发生抗原抗体反应，从而揭示此类单克隆抗体具有多反应性的特点，有别于“一把钥匙开一把锁”的特异性抗原抗体反应。此外，我们通过研究发现，多反应性抗体能够与凋亡细胞结合。值得关注的是，我们发现部分多反应性的单克隆抗体能够与多种HLA抗原发生反应，从而在单克隆抗体水平发现多反应性抗体与HLA抗体产生的相关性。当将研究扩展至患者血清学水平，我们发现，与HLA抗体阴性的患者相比，HLA抗体阳性的患者血清内多反应性抗体活性显著升高（p=0.009，p<0.001，p<0.001）。应用Spearman相关性分析发现300例肾移植患者血清中多反应性抗体活性与HLA抗体活性之间存在显著相关性（p=0.004，p<0.001，p=0.019）。在HLAI类抗体阳性的患者中，与血清多反应性抗体活性低的患者相比，血清多反应性抗体活性高的患者能够与更多的HLAI类抗原发生反应（p=0.030），因而从血清学水平揭示了多反应性抗体与HLA抗体的相关性。2、肾移植受者术前血清多反应性抗体与移植肾抗体介导排异反应及移植肾长期存活的相关性。我们通过对300例肾移植患者血清标本研究发现，肾移植术前患者血清多反应性抗体IgG的活性较正常人群显著性升高（p=0.011），而这种差异并非由于肾移植患者及正常人群血清中IgG抗体浓度的不同所致。在此项回顾性研究中，300例患者随访时间为81.2±35.3个月。46例患者在观察期内出现移植肾失功，我们通过研究发现移植肾失功的患者术前血清多反应性IgG活性显著高于移植肾功能正常的患者（p<0.001）。而且在46例移植肾失功的患者中，因抗体介导排异反应导致移植肾失功的患者血清多反应性IgG活性显著高于因其他原因导致移植肾失功的患者（p=0.033)。Kaplan-Meier生存曲线显示，移植前血清中多反应性抗体活性高的患者移植肾存活率显著降低（p<0.001），而多反应性IgG独立于HLA抗体之外对移植肾存活产生影响。进一步行Cox比例风险模型分析显示，血清多反应性抗体IgG活性是移植肾失功的独立危险因素（Hazard ratio=2.271，p<0.001）。本研究发现，肾移植患者血清多反应性IgG抗体对凋亡细胞的反应主要由IgG1亚型及IgG3亚型介导。多反应性抗体与凋亡细胞反应后可激活补体途径，致使C4d沉积于靶细胞表面。进一步分析显示，IgG1及IgG3亚型对凋亡细胞的反应性与C4d在靶细胞表面沉积强度呈显著相关性（p<0.001，p=0.005）。本研究分别从单克隆抗体水平及肾移植受者血清学水平研究发现多反应性抗体与HLA抗体的产生具有显著相关性，在交叉反应理论之外，为器官移植患者HLA抗体尤其是NDSA的产生原因提供新的依据；并发现多反应性抗体IgG与肾移植术后抗体介导的排异反应显著相关，并成为移植物失功的独立危险因素。本研究为肾移植患者术前风险评估提供了新的依据。在器官移植术前除常规检测HLA抗体之外，对患者血清多反应性抗体的监测有利于提高器官移植后移植物失功风险评估的准确性，并为器官移植术前高风险患者的去抗体治疗提供了新的理论及实验依据。