目的：本课题体外实验部分已经证实慢病毒载体介导的RNA干扰能高效、稳定的干扰HT-29细胞Livin基因的表达。HT-29细胞Livin基因抑制后，细胞增殖能力减弱，细胞凋亡增加，细胞周期重新分布，能增强5-Fu、奥沙利铂和伊立替康的抗肿瘤作用。现进一步通过体内实验探讨慢病毒载体介导RNA干扰沉默Livin基因表达，对大肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长及对放化疗敏感性的影响，初步阐明Livin是否可成为大肠癌治疗的一个新靶点。方法：1.将正常培养的HT-29细胞（空白对照组）、转染携带Livin基因短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）慢病毒的HT-29细胞（实验组），以及转染携带无关序列片段shRNA慢病毒的HT-29细胞（阴性对照组）分别接种于BALB/C(nu/nu)裸鼠，建立皮下移植瘤裸鼠模型，观察裸鼠体重及瘤体积的变化。第42天处死裸鼠后取下肿瘤组织，RT-PCR分析Livin mRNA表达的变化，免疫组化分析Livin蛋白表达的变化，TUNEL法检测细胞凋亡的变化。2.将第一代大肠癌HT-29细胞皮下移植瘤瘤组织块接种至裸鼠，待长成一定体积后分别瘤内注射干扰慢病毒（实验组）、空载慢病毒（阴性对照组）和生理盐水（空白对照组），同时腹腔内分别注入5-Fu、奥沙利铂和伊立替康。具体分为5-Fu、奥沙利铂和伊立替康实验组，5-Fu、奥沙利铂和伊立替康阴性对照组，以及5-Fu、奥沙利铂和伊立替康空白对照组共9组，挑选15个时间点共观察70天，每周2次，观察裸鼠的体重和肿瘤体积，绘制裸鼠体重和移植瘤生长曲线。3.将第一代大肠癌HT-29细胞皮下移植瘤瘤组织块接种至裸鼠，待长成一定体积后分别瘤内注射干扰慢病毒（实验组）、空载慢病毒（阴性对照组）和生理盐水（空白对照组），同时均给予6MV X线照射，2Gy/次，连续5天，总量为10Gy。共挑选24个时间点观察100天，观察裸鼠体重和肿瘤体积的变化，绘制体重和肿瘤生长曲线。4.结果均采用SPSS17.0软件进行统计分析，计量资料组间比较采用单因素方差分析，计数资料之间比较采用χ2检验，肿瘤体积生长采用重复测量方差分析， p<0.05有统计学意义，p<0.01有显著统计学差异。结果：1. Livin基因RNA干扰慢病毒载体系统的直接抑瘤作用：空白对照组、阴性对照组及实验组3组细胞均成瘤，成瘤率为100%。第42天处死裸鼠，3组裸鼠体重之间无统计学差异（F=0.352，p=0.709）。裸鼠移植瘤体积在各时期之间、分组之间存在总体差异（F=217.178，p<0.001；F=18.103，p<0.001）,各时期与分组之间存在交互作用（F=14.237, p<0.001）。体积抑瘤率为（50.04±0.07）%,瘤体重量明显减轻（F=4.847，p=0.024）,瘤重抑瘤率达（50.27±0.17）%。实验组Livin mRNA表达水平为(17.75±0.08)%，明显低于空白对照组（67.60±0.05）%和阴性对照组(68.54±0.03)%，差异有统计学意义(F=89.971, p<0.001)。实验组Livin蛋白表达水平为（36.00±3.40）%，明显低于空白对照组（85.00±3.15）%和阴性对照组（80.33±3.08）%,差异有统计学意义（F=107.321，p<0.001）。实验组沉默Livin基因后组织中细胞凋亡数增多，凋亡率为（23.67±2.25）%，明显高于空白对照组（5±1.50）%和阴性对照组（8.33±1.82）%，差异有统计学意义（F=56.936，p<0.001）。2. Livin基因RNA干扰慢病毒载体系统联合化疗药物的抑瘤作用：裸鼠体重在观察时间、分组总体之间都存在差异（F=3.086, p=0.002; F=11.739,p<0.001）。肿瘤体积在各时间点之间总体存在显著差异（F=64.993，p<0.001），在分组之间总体也存在显著差异（F=8.610，p<0.001）。5-Fu、奥沙利铂、伊立替康实验组肿瘤体积均显著小于它们的阴性对照组（p=0.001, p=0.049,p=0.001）。3. Livin基因RNA干扰慢病毒载体系统联合放射线的抑瘤作用：裸鼠体重在各观察时间点、分组之间总体无统计学差异（F=1.1015，p=0.330；F=1.022,p=0.383）。肿瘤体积在各时间点、分组之间总体存在显著差异（F=71.250，p<0.001；F=10.702，p=0.001）,实验组肿瘤体积显著小于阴性对照组和空白对照组（p均=0.001）。结论：慢病毒载体介导RNA干扰沉默Livin基因表达后，能抑制大肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤的生长，增加移植瘤对放化疗治疗的敏感性。Livin基因有望成为大肠癌治疗的新靶点，慢病毒载体介导的RNA干扰技术有望成为有效的基因治疗工具。